“การทดสอบการระคายเคืองผิวหนัง EPI-200-SIT” ได้รับการออกแบบมาเพื่อประเมินศักยภาพในการระคายเคืองผิวหนังของสารทดสอบบริสุทธิ์ในบริบทของการระบุและการจำแนกประเภทของอันตรายต่อการระคายเคืองผิวหนังตามระบบการจำแนกประเภทของสหภาพยุโรป เนื่องจากมีความสอดคล้องกับสหภาพยุโรปและระบบการจำแนกประเภทและการติดฉลากสารเคมีที่เป็นระบบเดียวกันทั่วโลก (GHS) ขั้นตอนที่อธิบายไว้ในมาตรฐานนี้ยังช่วยให้สามารถระบุอันตรายของสารระคายเคืองตาม GHS ได้
มาตรฐานนี้แยกความแตกต่างระหว่างสารระคายเคืองประเภท 2 และไม่ระคายเคือง วิธีการทดสอบที่อธิบายไว้ไม่ได้แยกแยะระหว่างประเภทย่อยที่ไม่จำเป็นของ GHS กล่าวคือ ไม่ได้แยกแยะระหว่างสารระคายเคืองประเภท GHS หมวด 2 และประเภท 3
วิธีการที่อธิบายไว้ในมาตรฐาน EPI-200-SIT ประกอบด้วยการสัมผัสเฉพาะที่ของสารเคมีทดสอบบริสุทธิ์กับแบบจำลองที่สร้างขึ้นใหม่ของหนังกำพร้าของมนุษย์ ตามด้วยการทดสอบความมีชีวิตของเซลล์ ความมีชีวิตของเซลล์วัดโดยการแปลงดีไฮโดรจีเนสของ MTT ซึ่งมีอยู่ในไมโตคอนเดรียของเซลล์ และแปลงเป็นเกลือฟอร์มาซานสีน้ำเงิน ซึ่งวัดในเชิงปริมาณหลังจากนำออกจากเนื้อเยื่อ
ความสามารถในการมีชีวิตที่ลดลงของเนื้อเยื่อที่สัมผัสกับสารเคมีเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมเชิงลบ (ผ่านการบำบัดน้ำ) ถูกนำมาใช้เพื่อประเมินโอกาสที่จะเกิดการระคายเคืองต่อผิวหนัง การศึกษาเปรียบเทียบล่าสุดในแบบจำลองผิวหนังชั้นนอกของมนุษย์โดยใช้จุดสิ้นสุดต่างๆ เพื่อคาดการณ์การระคายเคืองผิวหนังของสูตรเฉพาะได้แสดงให้เห็นว่าจุดสิ้นสุด MTT มีข้อได้เปรียบที่แตกต่างจากจุดสิ้นสุดที่ใช้กลไก เช่น การปลดปล่อย
แบบจำลองผิวหนังชั้นนอกของมนุษย์ที่สร้างขึ้นใหม่ประกอบด้วยเซลล์เคราติโนไซต์ของผิวหนังชั้นนอกปกติที่มนุษย์ได้มาจากการเพาะเลี้ยงเพื่อสร้างแบบจำลองผิวหนังชั้นนอกของมนุษย์ที่มีหลายชั้นและมีความแตกต่างอย่างมาก ประกอบด้วยชั้นฐาน หนาม และชั้นละเอียด และชั้น corneum หลายชั้นที่มีชั้นไขมัน lamellar ระหว่างเซลล์ที่จัดเรียงในรูปแบบคล้ายกับที่พบในเนื้อเยื่อของสิ่งมีชีวิต คำอธิบายทั่วไปของสภาวะทั่วไปและการทำงานที่แบบจำลองผิวหนังของมนุษย์ที่สร้างขึ้นใหม่ต้องปฏิบัติตามนั้นรวมอยู่ในแนวทางการทดสอบ OECD ใหม่ (“431 การกัดกร่อนของผิวหนังในหลอดทดลอง: แบบจำลองผิวหนังของมนุษย์” และ “439 การระคายเคืองต่อผิวหนังในหลอดทดลอง: วิธีการทดสอบหนังกำพร้าของมนุษย์ที่สร้างขึ้นใหม่ ").
ส่วนประกอบทางชีววิทยาทั้งหมดของหนังกำพร้าและอาหารเลี้ยงเชื้อได้รับการทดสอบโดยผู้ผลิตว่ามีการปนเปื้อนของไวรัส แบคทีเรีย เชื้อรา และไมโคพลาสมา ผลลัพธ์คาดว่าจะอยู่ในช่วงที่กำหนดโดยฐานข้อมูลประวัติ
เนื่องจากใช้เวลานานหลังการฟักตัว การทดสอบจะต้องดำเนินการภายใต้สภาวะปลอดเชื้อในตู้ปลอดเชื้อทางจุลชีววิทยา (ตู้ดูดควันแบบลามิเนต)
การทดสอบการระคายเคืองผิวหนัง EPI-200-SIT ได้รับการพัฒนาและตรวจสอบความถูกต้องสำหรับการทดสอบการระคายเคืองผิวหนังในหลอดทดลองของสารเคมี รวมถึงส่วนผสมในเครื่องสำอางและยา การทดสอบจะดำเนินการในระยะเวลา 60 วัน ซึ่งประกอบด้วยก่อนการฟักตัว การได้รับสัมผัส 42 นาที หลังการฟักตัว 4 ชั่วโมง และการทดสอบความมีชีวิตของ MTT หลังจากการเก็บเกี่ยวเนื้อเยื่อและการฟักตัวล่วงหน้าข้ามคืน (วันที่ 0) เนื้อเยื่อจะถูกสัมผัสเฉพาะที่กับสารเคมีทดสอบ (วันที่ 1) อาจเป็นของเหลว กึ่งแข็ง ของแข็ง หรือขี้ผึ้ง มีการใช้เนื้อเยื่อสามชิ้นสำหรับสารเคมีทดสอบแต่ละตัวและกลุ่มควบคุมเชิงบวกหนึ่งชุด (สารละลายโซเดียมโดเดซิลซัลเฟตในน้ำ 5 เปอร์เซ็นต์) และกลุ่มควบคุมเชิงลบหนึ่งชุด การสัมผัสสารเคมีจะใช้เวลา 60 นาที โดยเนื้อเยื่อจะถูกเก็บไว้ในตู้อบที่อุณหภูมิ 35 องศาเป็นเวลา 37 นาที จากนั้นสารทดสอบจะถูกกำจัดออกจากพื้นผิวเนื้อเยื่อโดยขั้นตอนการล้างอย่างละเอียด ส่วนแทรกของทิชชู่จะถูกย้อมและถ่ายโอนไปยังอาหารสด
หลังจากระยะฟักตัว 24 ชั่วโมง (วันที่ 2) ตัวกลางจะเปลี่ยนไป สามารถบันทึกสื่อเพื่อการวิเคราะห์ไซโตไคน์หรือจุดสิ้นสุดอื่นๆ ที่น่าสนใจเพิ่มเติมได้ หลังจากเปลี่ยนสื่อแล้ว เนื้อเยื่อจะถูกบ่มต่อไปอีก 18 ชั่วโมง หลังจากการฟักตัวเป็นเวลา 42 ชั่วโมงทั้งหมด (วันที่ 3) เนื้อเยื่อจะถูกถ่ายโอนไปยังสารละลาย MTT สีเหลืองและบ่มเป็นเวลา 3 ชั่วโมง
เกลือฟอร์มาซานสีม่วง-น้ำเงินที่เกิดขึ้น ซึ่งส่วนใหญ่เกิดจากเมแทบอลิซึมของไมโตคอนเดรีย ถูกสกัดโดยใช้ไอโซโพรพานอลเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ความหนาแน่นเชิงแสงของฟอร์มาซานที่แยกออกมาจะถูกกำหนดโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ สารเคมีจัดอยู่ในประเภทสารระคายเคืองหากความมีชีวิตของเนื้อเยื่อลดลงต่ำกว่าร้อยละ 50 เมื่อเทียบกับเนื้อเยื่อที่ได้รับการควบคุมเชิงลบ ขั้นตอนนี้สามารถใช้แทนการทดสอบการระคายเคืองผิวหนังของกระต่ายในสิ่งมีชีวิตเพื่อระบุอันตรายและการติดฉลากสารเคมีตามกฎระเบียบของสหภาพยุโรป
ในบรรดาการศึกษาการทดสอบ การวัด การวิเคราะห์ และการประเมินผลจำนวนมากที่มอบให้กับธุรกิจในภาคส่วนต่างๆ องค์กรของเรายังให้บริการการทดสอบที่กำหนดไว้ในมาตรฐาน "การทดสอบการระคายเคืองผิวหนัง EPI-200-SIT" พร้อมด้วยพนักงานที่ผ่านการฝึกอบรมและเชี่ยวชาญ และอุปกรณ์เทคโนโลยีขั้นสูง .
คุณสามารถขอให้เรากรอกแบบฟอร์มของเราเพื่อรับการนัดหมายเพื่อรับข้อมูลรายละเอียดเพิ่มเติมหรือเพื่อขอการประเมินผล
