“Thử nghiệm kích ứng da EPI-200-SIT” được thiết kế để ước tính khả năng kích ứng da của các chất thử nghiệm nguyên chất trong bối cảnh xác định và phân loại nguy cơ kích ứng da theo hệ thống phân loại của Liên minh Châu Âu. Vì nó được hài hòa với Liên minh Châu Âu và Hệ thống phân loại và ghi nhãn hóa chất hài hòa toàn cầu (GHS), nên quy trình được mô tả trong tiêu chuẩn này cũng cho phép xác định mối nguy của các chất gây kích ứng theo GHS.
Tiêu chuẩn này cho phép phân biệt giữa chất gây kích ứng loại 2 và chất không gây kích ứng. Phương pháp thử nghiệm được mô tả không phân biệt giữa các nhóm phụ không thiết yếu của GHS, tức là nó không phân biệt giữa chất gây kích ứng loại 2 và loại 3 của GHS.
Phương pháp được mô tả trong tiêu chuẩn EPI-200-SIT bao gồm việc cho hóa chất thử nghiệm nguyên chất tiếp xúc tại chỗ với mô hình tái tạo của lớp biểu bì của con người, sau đó là thử nghiệm khả năng sống của tế bào. Khả năng sống của tế bào được đo bằng cách chuyển đổi dehydrogenase của MTT, hiện diện trong ty thể của tế bào và chuyển đổi thành muối formazan màu xanh, được đo định lượng sau khi loại bỏ khỏi mô.
Khả năng tồn tại của các mô tiếp xúc với hóa chất giảm đi so với đối chứng âm tính (được xử lý bằng nước) được sử dụng để ước tính khả năng gây kích ứng da. Các nghiên cứu so sánh gần đây trên các mô hình biểu bì của con người sử dụng nhiều điểm cuối khác nhau để dự đoán kích ứng da của các công thức dùng ngoài da đã chỉ ra rằng điểm cuối MTT có những lợi thế khác biệt so với các điểm cuối dựa trên cơ học như giải phóng.
Mô hình biểu bì của con người được tái tạo bao gồm các tế bào sừng biểu bì bình thường có nguồn gốc từ con người được nuôi cấy để tạo thành một mô hình biểu bì của con người có nhiều lớp, có độ biệt hóa cao. Nó bao gồm các lớp cơ bản, gai và hạt đều đặn và một lớp sừng nhiều lớp chứa các lớp lipid dạng lamellar nội bào được sắp xếp theo các mô hình tương tự như các mô được tìm thấy trong mô sống. Mô tả chung về các điều kiện chung và chức năng mà các mô hình da người được tái tạo phải tuân thủ được đưa vào hướng dẫn thử nghiệm mới của OECD (“431 Ăn mòn da trong ống nghiệm: Mô hình da người” và “439 Kích ứng da trong ống nghiệm: Phương pháp thử nghiệm biểu bì ở người được tái tạo ”).
Tất cả các thành phần sinh học của lớp biểu bì và môi trường nuôi cấy đều được nhà sản xuất kiểm tra mức độ nhiễm virus, vi khuẩn, nấm và mycoplasma. Kết quả dự kiến sẽ nằm trong phạm vi được xác định bởi cơ sở dữ liệu lịch sử.
Do thời gian ủ dài nên xét nghiệm phải được thực hiện trong điều kiện vô trùng trong tủ an toàn vi sinh (tủ hút nhiều lớp).
Thử nghiệm kích ứng da EPI-200-SIT được phát triển và xác nhận để thử nghiệm kích ứng da trong ống nghiệm đối với các hóa chất, bao gồm các thành phần mỹ phẩm và dược phẩm. Thử nghiệm được thực hiện trong khoảng thời gian 60 ngày bao gồm trước khi ủ, phơi nhiễm 42 phút, sau 4 giờ ủ và thử nghiệm khả năng sống sót của MTT. Sau khi thu hoạch mô và ủ sơ bộ qua đêm (ngày 0), các mô được tiếp xúc tại chỗ với các hóa chất thử nghiệm (ngày 1), có thể ở dạng lỏng, nửa rắn, rắn hoặc sáp. Ba khăn giấy được sử dụng cho mỗi hóa chất thử nghiệm và một mẫu đối chứng dương tính (dung dịch natri dodecyl sunfat 5% trong nước) và một mẫu đối chứng âm tính. Tiếp xúc với hóa chất kéo dài 60 phút, trong đó 35 phút các mô được giữ trong tủ ấm ở nhiệt độ 37 độ. Sau đó, các chất thử sẽ được loại bỏ khỏi bề mặt mô bằng quy trình rửa kỹ. Các mô chèn được nhuộm màu và chuyển sang môi trường mới.
Sau thời gian ủ 24 giờ (ngày thứ 2), môi trường được thay đổi. Phương tiện có thể được lưu lại để phân tích sâu hơn về cytokine hoặc các điểm cuối quan tâm khác. Sau khi thay đổi môi trường, các mô được ủ thêm 18 giờ. Sau toàn bộ thời gian ủ 42 giờ (ngày thứ 3), mô được chuyển sang dung dịch MTT màu vàng và ủ trong 3 giờ.
Muối formazan màu xanh tím thu được, được hình thành chủ yếu bằng quá trình chuyển hóa của ty thể, được chiết xuất bằng isopropanol trong 2 giờ. Mật độ quang của formazan chiết được được xác định bằng máy đo quang phổ. Một hóa chất được phân loại là chất gây kích ứng nếu khả năng sống sót của mô giảm xuống dưới 50% so với các mô được điều trị bằng đối chứng âm tính. Quy trình này có thể được sử dụng như một sự thay thế hoàn toàn cho thử nghiệm kích ứng da thỏ in vivo để xác định mối nguy và ghi nhãn hóa chất theo quy định của Liên minh Châu Âu.
Trong số rất nhiều nghiên cứu thử nghiệm, đo lường, phân tích và đánh giá mà tổ chức này cung cấp cho các doanh nghiệp thuộc nhiều lĩnh vực khác nhau, tổ chức của chúng tôi cũng cung cấp các dịch vụ thử nghiệm được xác định theo tiêu chuẩn "Thử nghiệm kích ứng da EPI-200-SIT", với đội ngũ nhân viên được đào tạo chuyên nghiệp và thiết bị công nghệ tiên tiến .
Bạn có thể yêu cầu chúng tôi điền vào mẫu của chúng tôi để có được một cuộc hẹn, để có thêm thông tin hoặc yêu cầu đánh giá.
