“Tes iritasi kulit EPI-200-SIT” dirancang untuk memperkirakan potensi iritasi kulit dari bahan uji murni dalam konteks identifikasi dan klasifikasi bahaya iritasi kulit menurut sistem klasifikasi Uni Eropa. Karena selaras dengan Uni Eropa dan Sistem Harmonisasi Global Klasifikasi dan Pelabelan Bahan Kimia (GHS), prosedur yang dijelaskan dalam standar ini juga memungkinkan identifikasi bahaya bahan iritan sesuai dengan GHS.
Standar ini memungkinkan pembedaan antara bahan iritan kategori 2 dan non-iritasi. Metode pengujian yang dijelaskan tidak membedakan subkategori GHS non-esensial, yaitu tidak membedakan antara iritan GHS kategori 2 dan kategori 3.
Metode yang dijelaskan dalam standar EPI-200-SIT terdiri dari paparan topikal bahan kimia uji murni ke model epidermis manusia yang direkonstruksi diikuti dengan pengujian viabilitas sel. Viabilitas sel diukur dengan konversi dehidrogenase MTT, yang terdapat dalam mitokondria sel dan diubah menjadi garam formazan biru, yang diukur secara kuantitatif setelah dikeluarkan dari jaringan.
Berkurangnya viabilitas jaringan yang terpapar bahan kimia dibandingkan dengan kontrol negatif (yang diberi perlakuan air) digunakan untuk memperkirakan potensi iritasi kulit. Studi komparatif terbaru pada model epidermis manusia yang menggunakan berbagai titik akhir untuk memprediksi iritasi kulit dari formulasi topikal telah menunjukkan bahwa titik akhir MTT memiliki keunggulan tersendiri dibandingkan titik akhir yang berbasis mekanis seperti pelepasan.
Model epidermis manusia yang direkonstruksi terdiri dari keratinosit epidermal normal yang diturunkan dari manusia yang dikultur untuk membentuk model epidermis manusia yang berlapis-lapis dan sangat terdiferensiasi. Ini terdiri dari lapisan basal, berduri dan granular teratur dan stratum korneum berlapis-lapis yang mengandung lapisan lipid pipih antar sel yang disusun dalam pola yang mirip dengan yang ditemukan pada jaringan hidup. Gambaran umum tentang kondisi umum dan fungsional yang harus dipatuhi oleh model kulit manusia yang direkonstruksi disertakan dalam pedoman pengujian OECD yang baru (“431 Korosi kulit in vitro: Model kulit manusia” dan “439 Iritasi kulit in vitro: Metode pengujian epidermis manusia yang direkonstruksi ”).
Semua komponen biologis epidermis dan media kultur diuji oleh produsen untuk mengetahui adanya kontaminasi virus, bakteri, jamur, dan mikoplasma. Hasilnya diharapkan berada dalam kisaran yang ditentukan oleh database historis.
Karena waktu pasca inkubasi yang lama, pengujian harus dilakukan dalam kondisi aseptik dalam lemari pengaman mikrobiologi (laminar flow hood).
Tes iritasi kulit EPI-200-SIT dikembangkan dan divalidasi untuk pengujian iritasi kulit in vitro terhadap bahan kimia, termasuk bahan kosmetik dan farmasi. Pengujian dilakukan selama 60 hari yang terdiri dari pra inkubasi, pemaparan 42 menit, 4 jam pasca inkubasi, dan pengujian viabilitas MTT. Setelah pengambilan jaringan dan preinkubasi semalaman (hari ke-0), jaringan dipaparkan secara topikal dengan bahan kimia uji (hari ke-1), yang dapat berupa cairan, semipadat, padat, atau lilin. Tiga jaringan digunakan untuk setiap bahan kimia uji dan satu kontrol positif (larutan natrium dodesil sulfat 5 persen) dan satu kontrol negatif. Paparan bahan kimia berlangsung selama 60 menit, dimana 35 menit jaringan disimpan dalam inkubator pada suhu 37 derajat. Zat uji kemudian dikeluarkan dari permukaan jaringan melalui prosedur pencucian ekstensif. Sisipan jaringan diwarnai dan dipindahkan ke media segar.
Setelah masa inkubasi 24 jam (hari ke-2), media diubah. Media dapat disimpan untuk analisis sitokin lebih lanjut atau titik akhir lainnya. Setelah penggantian media, jaringan diinkubasi selama 18 jam tambahan. Setelah seluruh inkubasi 42 jam (hari ke-3), jaringan dipindahkan ke larutan MTT kuning dan diinkubasi selama 3 jam.
Garam formazan ungu-biru yang dihasilkan, dibentuk terutama oleh metabolisme mitokondria, diekstraksi menggunakan isopropanol selama 2 jam. Kepadatan optik formazan yang diekstraksi ditentukan dengan menggunakan spektrofotometer. Suatu bahan kimia diklasifikasikan sebagai iritan jika viabilitas jaringan turun di bawah 50 persen dibandingkan dengan jaringan yang diberi kontrol negatif. Prosedur ini dapat digunakan sebagai pengganti lengkap uji iritasi kulit kelinci in vivo untuk identifikasi bahaya dan pelabelan bahan kimia sesuai dengan peraturan Uni Eropa.
Di antara banyak studi pengujian, pengukuran, analisis dan evaluasi yang disediakan untuk bisnis di berbagai sektor, organisasi kami juga menyediakan layanan pengujian yang ditentukan dalam standar "Tes iritasi kulit EPI-200-SIT", dengan staf yang terlatih dan ahli serta peralatan teknologi canggih .
Anda dapat meminta kami untuk mengisi formulir kami untuk mendapatkan janji, untuk mendapatkan informasi lebih lanjut atau untuk meminta evaluasi.
