Untuk uji biokompatibilitas yang memerlukan genotoksisitas, kami menawarkan beberapa jenis uji, termasuk Mutagenisitas Ames, Aberasi Kromosom, Limfoma Tikus, dan Mikronukleus Tikus, bergantung pada jenis produk dan persyaratan data Anda. Tes ini sesuai dengan pedoman OECD dan ISO sebagai salah satu dari tiga tingkat tes in vitro untuk genotoksisitas.
Uji Mutagenisitas Ames digunakan untuk mengetahui potensi aktivitas mutagenik suatu ekstrak dari alat / bahan medis. Uji Mutasi Terbalik Bakteri (uji Ames) dilakukan sebagai bagian dari uji genotoksisitas untuk menentukan apakah kebocoran dari perangkat / bahan medis bersifat mutagenik.
Tes Aberasi Kromosom digunakan untuk memindai perangkat / perlengkapan medis untuk menentukan apakah mereka menyebabkan kelainan kromosom struktural pada sel Chinese Hamster Ovary (CHO). Tes dilakukan pada perangkat / bahan dengan kontak pasien permanen, kontak pasien dalam waktu lama, atau kontak darah. Tes Aberasi Kromosom sesuai dengan pedoman OECD dan ISO sebagai salah satu dari tiga tingkat pengujian genotoksisitas in vitro.
Pengujian Limfoma Tikus sering menggunakan kultur sel mamalia untuk mengidentifikasi mutasi gen, perubahan struktur dan jumlah kromosom, dan toksisitas gen lain yang disebabkan oleh perangkat medis, bahan atau ekstrak. Tes ini digunakan untuk memastikan bahwa perangkat yang memiliki kontak jangka panjang dengan tubuh tidak mengungkapkan genotoksisitas yang dapat menyebabkan mutasi gen dengan potensi kanker.
Tes Mikronukleus Tikus digunakan untuk mengevaluasi potensi perangkat medis untuk menginduksi pembentukan mikronukleus pada eritrosit polikromatik yang belum matang yang ditemukan di sumsum tulang tikus dewasa.
Mutagenisitas Ames
Uji Mutagenisitas Ames menggunakan beberapa strain Salmonella typhimurium yang dipilih karena kerentanannya terhadap mutasi karena:
Strain uji juga membutuhkan histidin untuk pertumbuhan karena mutasi pada gen yang mengontrol produksi histidin. Uji Ames dilakukan dengan mencampurkan ekstrak zat uji dengan organisme uji dalam larutan agar lembut yang hanya mengandung sedikit histidin. Histidin memungkinkan organisme uji yang diinokulasi memasuki kompartemen dalam jumlah terbatas, tetapi tidak cukup untuk memungkinkan pertumbuhan normal.
Namun, jika strain mengalami mutasi balik (spontan atau diinduksi oleh zat uji atau bahan kontrol positif), organisme tidak lagi memerlukan histidin untuk tumbuh dan dapat menghasilkan koloni yang terlihat atau reversibel. Mutasi pada organisme uji hanya di wilayah gen histidin menyebabkan organisme uji membalik mutasi menjadi organisme, yang tidak lagi memerlukan histidin.
Strain uji dipilih untuk mendeteksi berbagai jenis mutagen. Strain uji yang digunakan adalah TA97A, TA98, TA100, TA102 dan TA1535. Tes spot juga dilakukan di mana ekstrak produk uji diwarnai pada piring yang mengandung sejumlah kecil organisme uji yang mengandung histidin. Saat zat uji berdifusi melalui agar-agar, itu menjadi lebih encer. Hal ini memungkinkan deteksi mutagen yang menyebabkan beberapa penghambatan strain penguji. Pengujian dilakukan dengan aktivasi S-9 atau tanpa aktivasi S-9. Sistem aktivasi S-9 dirancang untuk mensimulasikan sistem enzim hati mamalia dan digunakan untuk mendeteksi zat yang mengalami aktivasi metabolik dari bentuk non-mutagenik.
Tes Aberasi Kromosom dilakukan dengan memaparkan sel CHO ke ekstrak zat uji. Media pembuangan termasuk dalam pengujian sebagai kontrol negatif.
Sel CHO disemai dalam labu kultur sel berukuran 75 cm2 dan diinkubasi dengan media kultur sel + 10% serum sampai pertemuan 40-60%.
Sel CHO terpapar pada ekstrak produk uji dengan ada dan tidak adanya sistem aktivasi metabolik. Sistem aktivasi metabolik adalah campuran S9 homogenate, isocitrate dan NADP. Kontrol positif yang digunakan adalah Siklofosfamid dengan aktivasi metabolik dan Mitomycin C tanpa aktivasi metabolik.
Sebelum panen sel, sel diperiksa sitotoksisitasnya. Botol diberi skor berdasarkan derajat sitotoksisitas morfologi yang dapat dibedakan pada skala relatif 10993 - 5 menurut AAMI / ANSI / ISO 87-0 dan USP <4>. Rata-rata hasil dari tiga botol dirata-ratakan untuk memberikan skor sitotoksisitas akhir.
Pada akhir periode pemaparan dan ekspresi, sel ditangkap di metafase dengan coltazide. Sel-sel tersebut kemudian dikeluarkan dari botol dan diperlakukan dengan larutan hipotonik dan fiksatif. Sel disimpan pada slide mikroskop. Kromosom diwarnai dengan pewarnaan Giemsa dan ditutup dengan Permount®. Sel-sel tersebut kemudian diperiksa secara mikroskopis untuk mengetahui adanya kelainan kromosom.
Biokompatibilitas Dalam pengujian genotoksisitas, sel limfoma tikus digunakan untuk menentukan apakah bahan uji mampu menginduksi mutasi titik atau klastogenik (kerusakan kromosom) dalam garis sel mamalia yang dibudidayakan. Dalam hal ini, gen target, timidin kinase (TK), adalah gen yang dapat dibuang. Hilangnya aktivitas TK menunjukkan bahwa telah terjadi mutasi. Karena TK terlibat dalam jalur penyelamatan yang berasal dari metabolisme DNA, sel dapat mensintesis timidin de novo. Oleh karena itu, hilangnya TK tidak membuat sel menjadi mati.
Mutan dapat dipilih dan frekuensi mutan dapat diturunkan dengan memasukkan analog timidin (trifluorotimidin atau TFT) ke dalam media kultur sel setelah terpapar bahan uji. Sel biasa dengan TK utuh termasuk analog dan template; Sel mutan (kurang aktivitas TK) bertahan hidup, membentuk koloni dan mengukur.
Dalam uji Mikronukleus Mouse, perangkat medis dilepaskan di lingkungan kutub dan non-kutub. Ekstrak produk uji kontrol positif dan kontrol negatif diberikan pada 20 mL / kg pada tikus jantan dan betina. Sumsum tulang kemudian diambil 24 dan 48 jam setelah pemberian dosis dan diperiksa keberadaan mikronuklear polikromatik eritrosit (PCE). Adanya PCE merupakan indikasi kebocoran zat mutagenik dari perangkat.
EUROLAB, dengan tim yang sangat ahli dan laboratorium yang terakreditasi internasional, Tes Genotoksisitas melakukan semua layanan pengujian, analisis, pengukuran, evaluasi, dan pembuatan laporan secara lengkap dan andal.
Anda dapat meminta kami untuk mengisi formulir kami untuk mendapatkan janji, untuk mendapatkan informasi lebih lanjut atau untuk meminta evaluasi.
