„Тестът за дразнене на кожата EPI-200-SIT“ е предназначен да оцени потенциала за дразнене на кожата на чисти изпитвани вещества в контекста на идентифициране и класифициране на опасността от дразнене на кожата съгласно системата за класификация на Европейския съюз. Тъй като е хармонизирана с Европейския съюз и Глобално хармонизираната система за класификация и етикетиране на химикали (GHS), процедурата, описана в този стандарт, също така позволява идентифициране на опасността от дразнители в съответствие с GHS.
Този стандарт позволява разграничение между дразнещи и недразнещи вещества от категория 2. Описаният метод за изпитване не прави разлика между несъществени подкатегории на GHS, т.е. не прави разлика между дразнители от категория 2 и категория 3 по GHS.
Методът, описан в стандарта EPI-200-SIT, се състои от локално излагане на чист изпитван химикал върху реконструиран модел на човешки епидермис, последвано от тестване на клетъчната жизнеспособност. Клетъчната жизнеспособност се измерва чрез дехидрогеназна конверсия на МТТ, който присъства в клетъчните митохондрии и се превръща в синя формазанова сол, която се измерва количествено след отстраняване от тъканите.
Намалената жизнеспособност на тъканите, изложени на химикали, в сравнение с отрицателните контроли (обработени с вода) се използва за оценка на потенциала за дразнене на кожата. Скорошни сравнителни проучвания при модели на човешки епидермис, използващи различни крайни точки за предсказване на кожно дразнене на локални формулировки, показаха, че крайната точка на МТТ има различни предимства пред дори механично базирани крайни точки, като например освобождаване.
Реконструираният човешки епидермален модел се състои от нормални човешки епидермални кератиноцити, култивирани за образуване на многослоен, силно диференциран модел на човешки епидермис. Състои се от правилни основни, бодливи и гранулирани слоеве и многослоен рогов слой, съдържащ междуклетъчни ламеларни липидни слоеве, подредени в модели, подобни на тези в живата тъкан. Общо описание на общите и функционални условия, на които трябва да отговарят реконструираните модели на човешка кожа, е включено в новите насоки за изпитване на OECD („431 In vitro кожна корозия: Модел на човешка кожа“ и „439 In vitro кожно дразнене: Метод за изпитване на реконструиран човешки епидермис “).
Всички биологични компоненти на епидермиса и хранителната среда са тествани от производителя за вирусно, бактериално, гъбично и микоплазмено замърсяване. Резултатите се очаква да бъдат в диапазон, определен от историческата база данни.
Поради дългото време след инкубация, тестът трябва да се извърши при асептични условия в микробиологичен безопасен шкаф (качулка с ламинарен поток).
Тестът EPI-200-SIT за дразнене на кожата е разработен и валидиран за in vitro тестване на дразнене на кожата на химикали, включително козметични и фармацевтични съставки. Тестването се извършва за период от 60 дни, състоящ се от предварителна инкубация, 42-минутна експозиция, 4-часова слединкубация и МТТ тестване за жизнеспособност. След събиране на тъкани и предварителна инкубация за една нощ (ден 0), тъканите се излагат локално на изпитвани химикали (ден 1), които могат да бъдат течни, полутвърди, твърди или восъчни. Използват се три тъкани за всеки изпитван химикал и една положителна контрола (5 процента воден разтвор на натриев додецилсулфат) и една отрицателна контрола. Химическата експозиция е с продължителност 60 минути, от които 35 минути тъканите се държат в инкубатор при 37 градуса. След това изпитваните вещества се отстраняват от повърхността на тъканта чрез продължителна процедура на измиване. Тъканните вложки се оцветяват и се прехвърлят в свежа среда.
След 24-часов инкубационен период (ден 2) средата се сменя. Медиите могат да бъдат запазени за по-нататъшен анализ на цитокини или други крайни точки от интерес. След смяната на средата тъканите се инкубират още 18 часа. След цялата 42-часова инкубация (ден 3), тъканите се прехвърлят в жълт МТТ разтвор и се инкубират в продължение на 3 часа.
Получената лилаво-синя формазанова сол, образувана главно от митохондриален метаболизъм, се екстрахира с изопропанол в продължение на 2 часа. Оптичната плътност на екстрахирания формазан се определя с помощта на спектрофотометър. Даден химикал се класифицира като дразнител, ако жизнеспособността на тъканите падне под 50 процента спрямо тъканите, третирани с отрицателна контрола. Тази процедура може да се използва като пълна замяна на in vivo теста за дразнене на кожата на заек за идентифициране на опасността и етикетиране на химикали в съответствие с разпоредбите на Европейския съюз.
Сред многобройните проучвания за тестване, измерване, анализ и оценка, които предоставя за бизнеса в различни сектори, нашата организация също предоставя услуги за тестване, определени в стандарта „EPI-200-SIT Тест за дразнене на кожата“, със своя обучен и експертен персонал и усъвършенствано технологично оборудване .
Можете да ни помолите да попълним формуляра, за да получим среща, да получим по-подробна информация или да поискаме оценка.
