Štandardná “OECD TG 435 in vitro membránová bariérová testovacia metóda na podráždenie kože” publikovaná podľa smerníc OECD o zodpovednom obchodnom správaní pre nadnárodné spoločnosti (OECD smernice) popisuje in vitro membránovú bariérovú testovaciu metódu používanú na identifikáciu korozívnych chemikálií. Táto testovacia metóda využíva umelú membránu navrhnutú tak, aby reagovala na korozívne chemikálie podobným spôsobom ako zvieracia koža.
Metóda testovania membránovej bariéry in vitro sa môže použiť na testovanie pevných látok, kvapalín a emulzií. Vodné látky s hodnotami pH v rozsahu 4,5 až 8,5 však vo všeobecnosti nie sú vhodné na testovanie.
Opísaná testovacia metóda umožňuje identifikáciu žieravých chemikálií a zmesí a subkategorizáciu žieravých látok, ako to umožňuje celosvetovo harmonizovaný systém klasifikácie a označovania chemikálií. Táto klasifikácia je založená na dobe prieniku látky cez membránovú bariéru.
Tento testovací systém pozostáva z dvoch komponentov:
Pri použití tohto testovacieho systému sa pre každú testovanú látku a jej zodpovedajúce kontroly pripraví primeraný počet replikátov. Časy aplikácie testovanej látky na membránovú bariéru sa zaznamenávajú a striedajú. Čas (v minútach) medzi aplikáciou testovanej látky na membránovú bariéru a penetráciou bariéry sa používa na stanovenie žieravosti testovanej látky.
Žieravosť pre kožu sa tradične určovala aplikáciou testovanej chemikálie na kožu živých zvierat a hodnotením stupňa poškodenia tkaniva po určenom čase. Okrem štandardu OECD TG 435 bolo prijatých množstvo ďalších testovacích metód in vitro ako alternatívy k štandardnému postupu in vivo na králičej koži (OECD TG 404), ktorý sa používa na identifikáciu žieravých chemikálií. Smernice OECD odporúčajú používanie overených a akceptovaných testovacích metód in vitro.
V tomto modulárnom prístupe sa na klasifikáciu chemikálie ako žieravej používajú pozitívne výsledky z testovacích metód in vitro bez potreby testovania na zvieratách. Týmto spôsobom je zameraný na predchádzanie používaniu zvierat pri testoch a predchádzanie bolesti a strachu, ktoré môžu vzniknúť, ak sa zvieratá používajú na tento účel.
Táto testovacia metóda zisťuje poškodenie membránovej bariéry spôsobené žieravými testovanými chemikáliami po aplikácii testovanej chemikálie na povrch syntetickej makromolekulárnej membránovej bariéry prostredníctvom „chemického detekčného systému“, pravdepodobne pomocou rovnakých mechanizmov podráždenia, ktoré fungujú v živej koži.
Prienik alebo porušenie membránovej bariéry možno merať množstvom postupov alebo chemických detekčných systémov, vrátane zmeny farby farbiva indikátora pH alebo inej vlastnosti roztoku indikátora pod bariérou.
Musí sa určiť, že membránová bariéra je platná pre zamýšľané použitie, to znamená, že je relevantná a spoľahlivá. To zahŕňa zabezpečenie toho, aby boli rôzne prípravky konzistentné, pokiaľ ide o ich bariérové vlastnosti, ako napríklad schopnosť udržiavať bariéru proti nekorozívnym chemikáliám, schopnosť kategorizovať žieravé vlastnosti chemikálií do podkategórií žieravosti globálneho harmonizovaného systému klasifikácie a označovanie chemikálií. Priradená klasifikácia je založená na čase, ktorý chemikálii trvá prejsť cez membránovú bariéru a preniknúť do roztoku indikátora.
Pred rutinným použitím metódy membránového bariérového testu in vitro musia laboratóriá splniť túto normu a preukázať svoju technickú spôsobilosť správnou klasifikáciou navrhovaných kvalifikačných látok. Ak látka zo zoznamu nie je k dispozícii alebo je opodstatnená, možno použiť inú látku, pre ktorú sú k dispozícii dostatočné referenčné údaje in vivo a in vitro.
Skúšky sa musia vykonávať pri teplote okolia (rozsah 17-25 stupňov) a komponenty musia spĺňať podmienky uvedené v norme.
Pred vykonaním testovania membránovej bariéry sa vykoná test chemickej kompatibility, aby sa zistilo, či je testovaná chemikália detekovateľná systémom na detekciu chemikálií. Ak chemický detekčný systém nezistí testovanú chemikáliu, metóda membránového bariérového testu nie je vhodná na posúdenie potenciálnej žieravosti danej testovanej chemikálie a mala by sa použiť iná testovacia metóda. Chemický detekčný systém a podmienky expozície používané na testovanie kompatibility by mali odrážať expozíciu pri následnom testovaní membránovej bariéry.
Ak je to vhodné pre testovaciu metódu, testovaná chemikália kvalifikovaná na základe testovania kompatibility by sa mala podrobiť testu časovej kategórie, čo je skríningový test na rozlíšenie medzi slabými a silnými kyselinami alebo zásadami. Napríklad vo validovanej referenčnej testovacej metóde sa používa kategorizačný test na základe časovej stupnice na označenie, ktoré dve časové stupnice by sa mali použiť v závislosti od toho, či sa zistia významné zásoby kyselín alebo zásad. V závislosti od kyslej alebo alkalickej rezervy testovanej chemikálie by sa na určenie žieravosti mali použiť dve rôzne časové stupnice a globálne harmonizovaný systém klasifikácie a označovania chemikálií podkategórie žieravosti pre kožu.
Membránová bariéra pozostáva z dvoch zložiek: bielkovinového makromolekulárneho vodného gélu a priepustnej podpornej membrány. Proteínový gél by mal byť nepriepustný pre kvapaliny a pevné látky, ale môže sa erodovať a urobiť priepustným. Plne skonštruovaná membránová bariéra sa musí skladovať za vopred stanovených podmienok, ktoré preukázateľne zabraňujú degradácii gélu, ako je vysušenie, mikrobiálny rast, strihanie alebo praskanie, čo by znížilo jeho výkonnosť. Mala by sa určiť prijateľná doba skladovania a po tomto období by sa prípravky s membránovou bariérou nemali používať. Priepustná podporná membrána poskytuje mechanickú podporu proteínovému gélu počas procesu gélovatenia a vystavenia testovanej chemikálii. Podporná membrána by mala zabrániť ochabnutiu alebo posunutiu gélu a mala by byť ľahko priepustná pre všetky testované chemikálie.
Pokiaľ ide o chemický detekčný systém, roztok indikátora, ktorý je rovnaký ako roztok používaný na testovanie kompatibility, musí reagovať na prítomnosť testovanej chemikálie. Malo by sa použiť indikátorové farbivo pH alebo kombinácia farbív, ako je krezolová červeň a metylová oranž, ktoré prejavia zmenu farby v reakcii na prítomnosť testovanej chemikálie.
Spomedzi mnohých testovacích, meracích, analytických a hodnotiacich štúdií, ktoré poskytuje pre podniky v rôznych sektoroch, naša organizácia poskytuje aj testovacie služby definované v norme „OECD TG 435 In vitro membránová bariérová testovacia metóda na podráždenie pokožky“ s vyškoleným a odborným personálom. a moderné technologické vybavenie.
Môžete nás požiadať, aby sme vyplnili náš formulár, aby sme dostali schôdzku, získali podrobnejšie informácie alebo požiadali o vyhodnotenie.
