OECD TG 442E In Vitro senzibilizácia pokožky - test aktivácie ľudskej bunkovej línie (h-CLAT)

Norma „OECD TG 442E In vitro senzibilizácia kože – Test aktivácie ľudskej bunkovej línie (h-CLAT)“, publikovaná v rámci usmernení OECD o zodpovednom obchodnom správaní pre nadnárodné podniky (usmernenia OECD), sa navrhuje na riešenie aktivácie dendritických buniek, čo je kľúčová udalosť v ceste nežiaducich výsledkov senzibilizácie kože.

Táto testovacia smernica sa zaoberá sledovaným ukazovateľom rizika pre ľudské zdravie, ktorým je senzibilizácia pokožky po expozícii testovanej chemikálii. Senzibilizácia pokožky sa vzťahuje na alergickú reakciu po kontakte pokožky s testovanou chemikáliou, ako je definovaná v Globálne harmonizovanom systéme klasifikácie a označovania chemikálií Organizácie Spojených národov.

Táto norma poskytuje štyri testovacie metódy in vitro, ktoré sa zaoberajú rovnakou kľúčovou udalosťou v ceste negatívneho výsledku:

• Test aktivácie ľudskej bunkovej línie
• U937 Test aktivácie bunkovej línie
• Test reportérového génu interleukínu-8
• Rýchla detekcia genómových alergénov na hodnotenie kožných senzibilizátorov

Všetky tieto metódy sa používajú na podporu rozlišovania medzi látkami senzibilizujúcimi pokožku a látkami, ktoré ju nesenzibilizujú, v súlade s Globálne harmonizovaným systémom klasifikácie a označovania chemikálií Organizácie Spojených národov. Testovacie metódy opísané v tejto testovacej príručke kvantifikujú zmeny v expresii súboru génov spojených s procesom aktivácie monocytov a dendritických buniek (genomický biomarkerový podpis) po expozícii markerom na povrchu buniek alebo senzibilizátorom.

Norma OECD TG 442E je robustný in vitro test na identifikáciu potenciálnych chemických senzibilizátorov kože so širokou použiteľnosťou a viac ako 90-percentnou predikčnou presnosťou. Tento test poskytuje binárnu predikciu, ktorá klasifikuje testované vzorky ako senzibilizátory kože alebo nesenzibilizátory. Účelom tejto smernice je určiť, či chemická látka môže spôsobiť senzibilizáciu kože, t. j. alergickú kontaktnú dermatitídu, aktiváciou špecifických imunitných reakcií bez vykonania testovania na zvieratách.

Test aktivácie ľudskej bunkovej línie (h-CLAT) je in vitro (bez použitia zvierat) test, ktorý sa používa na posúdenie, či chemikália môže spôsobiť senzibilizáciu pokožky. Senzibilizácia pokožky je alergická reakcia spôsobená nadmernou reakciou imunitného systému na látku po kontakte s pokožkou. h-CLAT je navrhnutý tak, aby modeloval kľúčový biologický krok vo vývoji senzibilizácie pokožky: aktiváciu dendritických buniek (typ imunitných buniek) senzibilizujúcou chemikáliou.

Táto testovacia metóda je dôležitá, pretože nahrádza staršie testy na zvieratách. Okrem toho je norma OECD TG 442E cenená, pretože poskytuje štandardizované, vedecky validované a medzinárodne akceptované metódy na posúdenie, či chemikálie spôsobujú senzibilizáciu pokožky, čo je typ alergickej reakcie spôsobenej opakovanou expozíciou pokožky.

Metóda h-CLAT kvantifikuje zmeny v expresii povrchových markerov buniek spojené s procesom aktivácie monocytov a dendritických buniek v bunkovej línii ľudskej monocytovej leukémie THP-1 po expozícii senzibilizátorom. Namerané hladiny expresie povrchových markerov dendritických buniek sa potom používajú na podporu rozlíšenia medzi senzibilizátormi a desenzibilizátormi kože.

Táto metóda je in vitro test, ktorý meria zmeny v expresii povrchových markerov buniek v bunkách THP-1 bunkovej línie ľudskej monocytovej leukémie po 24 hodinách expozície testovanej chemikálii. Tieto povrchové molekuly sú typickými markermi aktivácie THP-1 monocytov a môžu napodobňovať aktiváciu dendritických buniek, ktoré hrajú kľúčovú úlohu pri aktivácii T buniek. Zmeny v expresii povrchových markerov sa merajú prietokovou cytometriou po farbení buniek protilátkami značenými fluorochrómom. Súčasne sa vykonáva meranie cytotoxicity, aby sa posúdilo, či dochádza k zvýšenej regulácii expresie povrchových markerov pri subcytotoxických koncentráciách. Vypočíta sa relatívna intenzita fluorescencie povrchových markerov v porovnaní s kontrolnou skupinou s rozpúšťadlom/vehikulom a použije sa v predikčnom modeli na podporu rozlišovania medzi senzibilizátormi a nesenzibilizátormi.

Stručne povedané, OECD TG 442 je nevyhnutná na podporu etického, spoľahlivého a globálne konzistentného testovania bezpečnosti chemických látok a spotrebných výrobkov, najmä vzhľadom na vyvíjajúce sa predpisy a verejný dopyt po vede bez krutosti na zvieratách.

Naša organizácia, ktorá už roky podporuje podniky vo všetkých sektoroch prostredníctvom širokej škály testovacích, meracích, analytických a hodnotiacich aktivít, má silný tím zamestnancov, ktorí pozorne sledujú globálny vývoj vo vede a technike a neustále sa zlepšujú. V tejto súvislosti poskytujeme podnikom aj testovacie služby v súlade s normou OECD TG 442E In vitro kožná citlivosť - test aktivácie ľudských bunkových línií (h-CLAT).