OECD TG 439 體外皮膚刺激：重建人類表皮測試方法

《經合組織技術小組 439 體外皮膚刺激：重組人表皮測試方法》標準是根據經合組織關於跨國公司負責任商業行為的指導方針（經合組織指導方針）發布的，描述了一種體外測試方法，用於根據聯合國全球統一分類和標籤制度（GHS）第 2 類對刺激性化學物質和混合物進行識別危害（物質和混合物）。

該方法基於重建的人類表皮（RhE），其整體設計密切模仿人類皮膚上部的生化和生理特性。細胞活力透過活體染料 MTT 酶促轉化為藍色甲臢鹽來測量，從組織中提取後進行定量測量。刺激性測試物質的定義是其將細胞活力降低至規定閾值水平以下（2 類等於 50% 或更低）的能力。有色化學品也可以使用 HPLC（高效能液相層析）程序進行測試。

共有三種經過驗證的測試方法符合 OECD TG 439 標準。根據所使用的監管框架和分類系統，該程序可用於確定測試物質的皮膚刺激性，作為體內皮膚刺激測試的獨立替代測試或作為分層測試策略中的部分替代測試。

原則上，測試化學物質局部應用於三維 RhE（重建人類表皮）模型，該模型由培養的、未轉化的人源表皮角質形成細胞組成，以創建多層、高度分化的人類表皮模型。它由規則的基底層、多刺層和顆粒層以及含有細胞間層狀脂質層的多層角質層組成，這些脂質層代表與體內發現的相似的主要脂質類別。

化學物質引起的皮膚刺激主要表現為紅斑和水腫，是化學物質穿過角質層並損害角質形成細胞和其他皮膚細胞下層時開始的一系列事件的結果。

受損的細胞可以釋放發炎介質或引發發炎級聯反應，此級聯反應也作用於真皮細胞，尤其是血管的基質細胞和內皮細胞。正是內皮細胞的擴張和通透性增加產生了觀察到的紅斑和水腫。特別是，當體外測定係統中沒有血管形成時，基於 RhE 的測定方法使用細胞活力作為讀數來測量級聯中的起始事件，例如細胞或組織損傷。

在 RhE 模型中，細胞活力是透過活性染料 MTT 酶促轉化為藍色甲臢鹽來測量的，從組織中取出後進行定量測量（MTT 用於評估細胞活力作為氧化還原電位的函數）。刺激性化學物質的定義是其將細胞活力降低至規定閾值水平以下（即第 2 類至少 50%）的能力。根據調節框架和該測試方法的適用性，產生高於定義閾值水平的細胞活力的測試化學品可能被認為是無刺激性的（即，無類別，至少 50%）。

應使用未轉化的人類角質形成細胞來重建上皮。有功能的角質層下必須有多層活的上皮細胞（基底層、棘層、顆粒層）。角質層必須是多層的，並含有必需的脂質成分，以形成具有韌性的功能屏障，以抵抗細胞毒性參考化學物質（例如十二烷基硫酸鈉）的快速滲透。

必須證明屏障功能，並且可以透過確定參考化學物質在固定暴露時間後使組織活力降低 50% 的濃度，或透過確定應用參考化學物質後使細胞活力降低 50% 所需的暴露時間來評估在指定的、固定的濃度下。 RhE（重建人類表皮）模型的保留特性應防止角質層周圍的材料遷移到活體組織中，從而導致皮膚暴露的建模效果不佳。 RhE 模型必須無細菌、病毒、支原體或真菌污染。

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