EPI-200-SIT 皮肤刺激测试

“EPI-200-SIT 皮肤刺激测试”旨在根据欧盟分类系统在皮肤刺激危害识别和分类的背景下估计纯测试物质的皮肤刺激潜力。由于它与欧盟和全球化学品统一分类和标签制度 (GHS) 保持一致，因此本标准中描述的程序还允许根据 GHS 对刺激物进行危险识别。

该标准允许区分 2 类刺激物和非刺激物。所述测试方法不区分 GHS 的非必要子类别，即不区分 GHS 类别 2 和类别 3 刺激物。

EPI-200-SIT 标准中描述的方法包括将纯测试化学品局部暴露于重建的人类表皮模型中，然后进行细胞活力测试。细胞活力通过 MTT 的脱氢酶转化来测量，MTT 存在于细胞线粒体中并转化为蓝色甲臜盐，从组织中取出后进行定量测量。

与阴性对照（经水处理）相比，接触化学品的组织活力降低，用于估计皮肤刺激的可能性。最近在人类表皮模型中使用各种终点来预测局部制剂的皮肤刺激性的比较研究表明，MTT 终点甚至比基于机械的终点（例如释放）也具有明显的优势。

重建的人表皮模型由正常人源性表皮角质形成细胞组成，经过培养形成多层、高度分化的人表皮模型。它由规则的基底层、多刺层和颗粒层以及含有细胞间层状脂质层的多层角质层组成，其排列方式与活体组织中的相似。新的 OECD 测试指南中包含了重建人体皮肤模型必须符合的一般和功能条件的一般描述（“431 体外皮肤腐蚀：人体皮肤模型”和“439 体外皮肤刺激：重建人体表皮测试方法”） ”）。

表皮和培养基的所有生物成分均由制造商进行病毒、细菌、真菌和支原体污染测试。预计结果将在历史数据库确定的范围内。

表皮细胞取自艾滋病毒和肝炎阴性的健康志愿者。然而，生物材料的处理程序应遵循：

• 建议在处理皮肤和套件组件时戴上手套。
• 使用后，表皮、材料和与其接触的所有介质必须在处置前进行净化（例如，使用 10% 漂白剂、特殊容器或高压灭菌）。

由于后孵育时间较长，测试必须在微生物安全柜（层流罩）的无菌条件下进行。

EPI-200-SIT 皮肤刺激测试是针对化学品（包括化妆品和药物成分）的体外皮肤刺激测试而开发和验证的。测试为期 60 天，包括预孵育、42 分钟暴露、4 小时孵育后和 MTT 活力测试。组织收获和过夜预孵育（第 0 天）后，将组织局部暴露于测试化学品（第 1 天），这些化学品可以是液体、半固体、固体或蜡。每种测试化学品使用三张组织，一张阳性对照（5％十二烷基硫酸钠水溶液）和一张阴性对照。化学暴露持续 60 分钟，其中 35 分钟将组织置于 37 度培养箱中。然后通过大量的清洗程序将测试物质从组织表面去除。将组织插入物染色并转移至新鲜培养基中。

24 小时潜伏期（第 2 天）后，更换培养基。可以保存培养基以供进一步分析细胞因子或其他感兴趣的终点。更换培养基后，将组织再孵育 18 小时。整个 42 小时孵育后（第 3 天），将组织转移至黄色 MTT 溶液中并孵育 3 小时。

使用异丙醇提取主要由线粒体代谢形成的紫蓝色甲臜盐 2 小时。使用分光光度计测定提取的甲臜的光密度。如果组织活力相对于阴性对照处理的组织下降到 50% 以下，则化学物质被归类为刺激物。该程序可完全替代体内兔皮肤刺激测试，用于根据欧盟法规进行化学品危险识别和标签。

在为各行业企业提供的众多测试、测量、分析和评估研究中，我们的组织还提供“EPI-200-SIT皮肤刺激性测试”标准中定义的测试服务，拥有训练有素的专家人员和先进的技术设备。