OECD TG 431 تحریک پوستی در شرایط آزمایشگاهی: روش آزمایش اپیدرم بازسازی شده انسان (RhE)

استاندارد «OECD TG 431 In vitro skin stimulation: Reconstructed human epidermis (RHE) test method» که تحت دستورالعمل‌های OECD در مورد رفتار تجاری مسئولانه برای شرکت‌های چندملیتی (دستورالعمل‌های OECD) منتشر شده است ، روشی آزمایشی را توصیف می‌کند که امکان شناسایی مواد شیمیایی و مخلوط‌های خورنده را فراهم می‌کند و در صورت پشتیبانی با وزن‌دهی شواهد با استفاده از سایر اطلاعات موجود، امکان شناسایی مواد و مخلوط‌های غیر خورنده را نیز فراهم می‌کند. این پروتکل آزمایش همچنین تمایز بین خورنده‌های شدید و خفیف پوست را نشان می‌دهد. این روش آزمایش نیازی به استفاده از حیوانات زنده یا بافت حیوانی برای ارزیابی خورندگی پوست ندارد.

خوردگی پوست به تولید آسیب غیرقابل برگشت پوستی اشاره دارد که به صورت نکروز قابل مشاهده از اپیدرم به درم پس از استفاده از یک ماده شیمیایی آزمایشی ظاهر می شود. استاندارد OECD TG 431 یک روش آزمایشگاهی را ارائه می دهد که امکان شناسایی مواد و مخلوط های غیر خورنده و خورنده را مطابق با سیستم جهانی هماهنگ طبقه بندی و برچسب گذاری مواد شیمیایی فراهم می کند. همچنین امکان طبقه بندی جزئی ساینده ها را فراهم می کند.

ارزیابی پتانسیل خوردگی پوست مواد شیمیایی اغلب شامل استفاده از حیوانات آزمایشگاهی است. با این حال، علاوه بر استاندارد OECD TG 431، استانداردهای OECD TG 430 و OECD TG 435 نیز برای آزمایش پتانسیل خوردگی مواد شیمیایی تایید و پذیرفته شده اند. علاوه بر این، استاندارد OECD TG 439 در شرایط آزمایشگاهی برای آزمایش پتانسیل تحریک پوست ایجاد شده است. سندی در مورد رویکردهای آزمایش و ارزیابی یکپارچه برای خوردگی و تحریک پوست، که منابع اطلاعاتی و ابزارهای تجزیه و تحلیل را گروه بندی می کند و راهنمایی در مورد نحوه ادغام و استفاده از داده های آزمایشی و غیر آزمایشی موجود برای ارزیابی پتانسیل تحریک پوست و خوردگی پوست مواد شیمیایی، و هنگامی که آزمایش بیشتری لازم است، چندین ماژول را توصیف می کند که یک رویکرد را پیشنهاد می کند.

این استاندارد به خوردگی پوست نقطه پایانی سلامت انسان می پردازد. از اپیدرم بازسازی شده انسان (RhE) (مشتق شده از کراتینوسیت های اپیدرمی تبدیل نشده با منشاء انسانی) استفاده می کند که از نزدیک خواص بافت شناسی، مورفولوژیکی، بیوشیمیایی و فیزیولوژیکی قسمت های بالایی پوست انسان، یعنی اپیدرم را تقلید می کند.

استاندارد OECD TG 431 شامل پنج روش تست معتبر با استفاده از مدل های RhE تجاری موجود است.

هنگام انجام این آزمایش، ماده شیمیایی مورد آزمایش به صورت موضعی بر روی یک مدل سه بعدی RhE شامل کراتینوسیت های اپیدرمی کشت شده، تبدیل نشده و مشتق از انسان برای ایجاد یک مدل چند لایه و بسیار متمایز از اپیدرم انسانی اعمال می شود. این لایه از لایه‌های پایه، خاردار و دانه‌ای منظم و یک لایه شاخی چند لایه حاوی لایه‌های لیپیدی لایه‌ای بین سلولی تشکیل شده است که نشان‌دهنده کلاس‌های چربی اصلی مشابه آنهایی است که در داخل بدن یافت می‌شوند.

دو تکرار بافت برای هر درمان (زمان قرار گرفتن در معرض) و کنترل استفاده می شود. مواد خورنده با توجه به توانایی آنها در ایجاد کاهش در زنده ماندن سلولی زیر سطح آستانه تعریف شده در زمان های قرار گرفتن در معرض مشخص تعریف می شوند. مواد شیمیایی رنگی را نیز می توان با استفاده از روش HPLC (کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) آزمایش کرد. اصل روش آزمایش مدل پوست انسان بر این فرض استوار است که مواد شیمیایی خورنده می توانند از طریق انتشار یا فرسایش به لایه شاخی نفوذ کنند و برای لایه های سلولی زیرین سیتوتوکسیک هستند. بقای سلول با تبدیل آنزیمی رنگ حیاتی MTT به نمک آبی فرمازان اندازه گیری می شود که پس از حذف از بافت ها به صورت کمی اندازه گیری می شود. نشان داده شده است که روش‌های تست تحریک پوستی مبتنی بر RhE برای شناسایی اثرات تحریک پوستی in vivo در خرگوش‌ها بر اساس استاندارد OECD TG 404 ارزیابی شده‌اند.

قبل از استفاده معمول از هر یک از پنج روش تست RhE معتبر مطابق با این استاندارد، آزمایشگاه ها باید مهارت خود را با طبقه بندی صحیح موارد مهارت پیشنهادی مطابق با این استاندارد نشان دهند. اگر روشی برای طبقه بندی فرعی استفاده می شود، باید زیررده بندی صحیح نیز نشان داده شود. در مواردی که یک ماده فهرست شده در دسترس نیست یا قابل توجیه است، ممکن است از ماده دیگری که اطلاعات مرجع in vivo و in vitro کافی برای آن موجود است استفاده شود.

روش های آزمایشی که در این استاندارد توضیح داده شده اند عبارتند از:

• EpiSkin™
• EpiDerm™ SCT
• SkinEthic™ RHE
• epiCS®
• LabCyte EPI-MODEL24 SCT

سازمان ما در میان آزمایش‌ها، اندازه‌گیری‌ها، تحلیل‌ها و بررسی‌های متعددی که برای کسب‌وکارها در بخش‌های مختلف انجام می‌دهد، با کادری آموزش‌دیده و متخصص و تجهیزات تکنولوژیکی پیشرفته، خدمات تست را نیز ارائه می‌کند.