استاندارد «OECD TG 439 تحریک پوستی آزمایشگاهی: روش آزمایش اپیدرم انسانی بازسازی‌شده» که تحت دستورالعمل‌های OECD در مورد رفتار تجاری مسئولانه برای شرکت‌های چندملیتی (دستورالعمل‌های OECD) منتشر شده است ، یک روش آزمایش آزمایشگاهی را شرح می‌دهد که برای شناسایی خطر مواد شیمیایی محرک (مواد و مخلوط‌ها) مطابق با رده ۲ سیستم طبقه‌بندی و برچسب‌گذاری هماهنگ جهانی سازمان ملل (GHS) استفاده می‌شود.
این روش بر اساس اپیدرم بازسازی شده انسان (RhE) است که در طراحی کلی خود از نزدیک خواص بیوشیمیایی و فیزیولوژیکی قسمت های بالایی پوست انسان را تقلید می کند. بقای سلول با تبدیل آنزیمی رنگ حیاتی MTT به نمک آبی فرمازان اندازه گیری می شود که پس از استخراج از بافت ها به صورت کمی اندازه گیری می شود. مواد آزمایشی محرک با توانایی آنها در کاهش زنده ماندن سلولی در زیر سطوح آستانه تعریف شده (برابر با 2 درصد یا کمتر برای دسته 50) تعریف می شوند. مواد شیمیایی رنگی را نیز می توان با استفاده از روش HPLC (کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) آزمایش کرد.
سه روش تست معتبر وجود دارد که با استاندارد OECD TG 439 مطابقت دارد. بسته به چارچوب نظارتی و سیستم طبقه‌بندی مورد استفاده، این روش می‌تواند برای تعیین تحریک پوستی مواد آزمایشی به‌عنوان یک آزمایش جایگزین مستقل برای آزمایش تحریک پوستی درون تنی یا به‌عنوان یک آزمایش جایگزین جزئی در یک استراتژی تست سطحی استفاده شود.
در اصل، ماده شیمیایی آزمایشی به صورت موضعی روی یک مدل سه بعدی RhE (اپیدرم بازسازی‌شده انسان) متشکل از کراتینوسیت‌های اپیدرمی مشتق‌شده از انسان کشت‌شده و تبدیل‌نشده برای ایجاد یک مدل چند لایه و بسیار متمایز از اپیدرم انسان استفاده می‌شود. این لایه از لایه‌های پایه، خاردار و دانه‌ای منظم و یک لایه شاخی چند لایه حاوی لایه‌های لیپیدی لایه‌ای بین سلولی تشکیل شده است که نشان‌دهنده کلاس‌های چربی اصلی مشابه آنهایی است که در داخل بدن یافت می‌شوند.
تحریک پوست ناشی از مواد شیمیایی عمدتاً با اریتم و ادم ظاهر می شود و نتیجه مجموعه ای از حوادث است که زمانی شروع می شود که مواد شیمیایی از لایه شاخی بدن عبور می کنند و به لایه های پایینی کراتینوسیت ها و سایر سلول های پوست آسیب می رسانند.
سلول های آسیب دیده می توانند واسطه های التهابی را آزاد کنند یا یک آبشار التهابی را آغاز کنند که روی سلول های درم، به ویژه سلول های استرومایی و اندوتلیال رگ های خونی نیز اثر می گذارد. این گسترش و افزایش نفوذپذیری سلول های اندوتلیال است که باعث ایجاد اریتم و ادم مشاهده شده می شود. به طور خاص، روش‌های سنجش مبتنی بر RhE، رویدادهای آغازگر را در آبشار اندازه‌گیری می‌کنند، مانند آسیب سلولی یا بافتی، با استفاده از زنده‌مانی سلولی به عنوان بازخوانی زمانی که عروقی شدن در سیستم سنجش آزمایشگاهی وجود ندارد.
در مدل RhE، زنده ماندن سلول با تبدیل آنزیمی رنگ حیاتی MTT به نمک آبی فرمازان اندازه گیری می شود که پس از حذف از بافت ها به صورت کمی اندازه گیری می شود (MTT برای ارزیابی زنده ماندن سلول به عنوان تابعی از پتانسیل ردوکس استفاده می شود). مواد شیمیایی محرک با توانایی آنها در کاهش زنده ماندن سلول در زیر سطوح آستانه تعریف شده (یعنی حداقل 2 درصد برای دسته 50) تعریف می شوند. بسته به چارچوب نظارتی و کاربرد این روش آزمایش، مواد شیمیایی آزمایشی که زنده ماندن سلول را بالاتر از یک سطح آستانه تعریف شده ایجاد می‌کنند ممکن است غیر تحریک‌کننده در نظر گرفته شوند (یعنی بدون دسته، حداقل 50 درصد).
برای بازسازی اپیتلیوم باید از کراتینوسیت های انسانی تبدیل نشده استفاده شود. در زیر یک لایه شاخی عملکردی، باید لایه های زیادی از سلول های اپیتلیال زنده (لایه پایه، لایه خاردار، لایه گرانولوزوم) وجود داشته باشد. لایه شاخی باید چند لایه باشد، حاوی مشخصات لیپیدی ضروری برای تشکیل یک سد عملکردی با چقرمگی برای مقاومت در برابر نفوذ سریع مواد شیمیایی مرجع سیتوتوکسیک، مانند سدیم دودآسیل سولفات.
عملکرد سد باید نشان داده شود و می توان آن را با تعیین غلظتی که در آن یک ماده شیمیایی مرجع زنده ماندن بافت را تا 50 درصد پس از یک زمان قرار گرفتن در معرض ثابت کاهش می دهد، یا با تعیین زمان قرار گرفتن در معرض مورد نیاز برای کاهش زنده ماندن سلول تا 50 درصد پس از استفاده از ماده شیمیایی مرجع ارزیابی شود. در غلظت مشخص و ثابت ویژگی‌های نگهداری مدل RhE (اپیدرم بازسازی‌شده انسان) باید از مهاجرت مواد اطراف لایه شاخی به بافت زنده و در نتیجه مدل‌سازی ضعیف قرار گرفتن در معرض پوست جلوگیری کند. مدل RhE باید عاری از آلودگی باکتریایی، ویروسی، مایکوپلاسما یا قارچی باشد.
در میان آزمایش‌ها، اندازه‌گیری‌ها، تجزیه و تحلیل‌ها و ارزیابی‌های متعددی که سازمان ما برای مشاغل در بخش‌های مختلف ارائه می‌کند، با کارکنان آموزش دیده و متخصص و تجهیزات فن‌آوری پیشرفته، ما همچنین خدمات آزمایشی را ارائه می‌کنیم که در "OECD TG 439 تحریک پوستی در شرایط آزمایشگاهی: انسان بازسازی‌شده روش تست اپیدرم" استاندارد. می دهد.
برای دریافت قرار ملاقات، برای دریافت اطلاعات دقیق تر و یا درخواست ارزیابی، می توانید از ما بخواهید فرم ما را پر کند و به شما برسد.
