„EPI-200-SIT Test podráždenia pokožky“ je určený na odhadnutie potenciálu čistých testovaných látok na podráždenie kože v kontexte identifikácie a klasifikácie nebezpečenstva podráždenia kože podľa klasifikačného systému Európskej únie. Keďže postup opísaný v tejto norme je harmonizovaný s Európskou úniou a Globálnym harmonizovaným systémom klasifikácie a označovania chemikálií (GHS), umožňuje aj identifikáciu nebezpečenstva dráždivých látok v súlade s GHS.
Táto norma umožňuje rozlišovať medzi dráždivými a nedráždivými látkami kategórie 2. Opísaná testovacia metóda nerozlišuje medzi nepodstatnými podkategóriami GHS, t. j. nerozlišuje medzi dráždivými látkami GHS kategórie 2 a kategórie 3.
Metóda opísaná v štandarde EPI-200-SIT pozostáva z lokálnej expozície čistej testovanej chemikálie rekonštruovanému modelu ľudskej epidermy, po ktorej nasleduje testovanie životaschopnosti buniek. Životaschopnosť buniek sa meria dehydrogenázovou konverziou MTT, ktorá je prítomná v bunkových mitochondriách a konvertuje sa na modrú formazanovú soľ, ktorá sa meria kvantitatívne po odstránení z tkanív.
Znížená životaschopnosť tkanív vystavených chemikáliám v porovnaní s negatívnymi kontrolami (ošetrenými vodou) sa používa na odhad potenciálu podráždenia kože. Nedávne porovnávacie štúdie na modeloch ľudskej epidermy s použitím rôznych koncových bodov na predpovedanie podráždenia kože lokálnych formulácií ukázali, že koncový bod MTT má výrazné výhody v porovnaní s dokonca aj mechanicky založenými koncovými bodmi, ako je uvoľňovanie.
Rekonštruovaný ľudský epidermálny model pozostáva z normálnych epidermálnych keratinocytov získaných z človeka kultivovaných tak, aby vytvorili viacvrstvový, vysoko diferencovaný model ľudskej epidermy. Pozostáva z pravidelných bazálnych, ostnatých a zrnitých vrstiev a viacvrstvovej stratum corneum obsahujúcej medzibunkové lamelárne lipidové vrstvy usporiadané do vzorov podobných tým, ktoré sa nachádzajú v živom tkanive. Všeobecný popis všeobecných a funkčných podmienok, ktoré musia rekonštruované modely ľudskej kože spĺňať, je zahrnutý v nových testovacích usmerneniach OECD („431 Poleptanie kože in vitro: Model ľudskej kože“ a „439 Podráždenie kože in vitro: Testovacia metóda zrekonštruovanej ľudskej epidermy“ “).
Všetky biologické zložky epidermy a kultivačného média sú výrobcom testované na vírusovú, bakteriálnu, plesňovú a mykoplazmovú kontamináciu. Očakáva sa, že výsledky budú v rámci rozsahu určeného historickou databázou.
Kvôli dlhej dobe po inkubácii sa musí test vykonať za aseptických podmienok v mikrobiologickej bezpečnostnej skrini (kryt s laminárnym prúdením).
Test podráždenia pokožky EPI-200-SIT bol vyvinutý a overený na testovanie podráždenia pokožky in vitro chemickými látkami, vrátane kozmetických a farmaceutických prísad. Testovanie sa uskutočňuje počas 60-dňového obdobia pozostávajúceho z predinkubácie, 42-minútovej expozície, 4-hodinovej po inkubácii a testovania životaschopnosti MTT. Po odbere tkaniva a predinkubácii cez noc (deň 0) sa tkanivá lokálne vystavia testovaným chemikáliám (deň 1), ktoré môžu byť tekuté, polotuhé, tuhé alebo voskové. Pre každú testovanú chemikáliu sa použijú tri tkanivá a jedna pozitívna kontrola (5 % vodný roztok dodecylsulfátu sodného) a jedna negatívna kontrola. Chemická expozícia trvá 60 minút, z toho 35 minút sa tkanivá uchovávajú v inkubátore pri 37 stupňoch. Testované látky sa potom z povrchu tkaniva odstránia rozsiahlym umývacím postupom. Tkanivové vložky sa zafarbia a prenesú do čerstvého média.
Po 24-hodinovej inkubačnej dobe (deň 2) sa médium vymení. Médiá možno uložiť na ďalšiu analýzu cytokínov alebo iných cieľových bodov záujmu. Po výmene média sa tkanivá inkubujú ďalších 18 hodín. Po celej 42-hodinovej inkubácii (deň 3) sa tkanivá prenesú do žltého roztoku MTT a inkubujú sa 3 hodiny.
Výsledná fialovo-modrá formazánová soľ, vytvorená hlavne mitochondriálnym metabolizmom, sa extrahuje izopropanolom počas 2 hodín. Optická hustota extrahovaného formazanu sa stanoví pomocou spektrofotometra. Chemikália je klasifikovaná ako dráždivá, ak životaschopnosť tkaniva klesne pod 50 percent v porovnaní s tkanivami ošetrenými negatívnou kontrolou. Tento postup možno použiť ako úplnú náhradu za in vivo test podráždenia kože králika na identifikáciu nebezpečnosti a označovanie chemikálií v súlade s nariadeniami Európskej únie.
Spomedzi mnohých testovacích, meracích, analytických a hodnotiacich štúdií, ktoré poskytuje pre podniky v rôznych sektoroch, naša organizácia poskytuje aj testovacie služby definované v štandarde "EPI-200-SIT Skin podráždenie" s vyškoleným a odborným personálom a pokročilým technologickým vybavením. .
Môžete nás požiadať, aby sme vyplnili náš formulár, aby sme dostali schôdzku, získali podrobnejšie informácie alebo požiadali o vyhodnotenie.
