Na testovanie biokompatibility, ktoré si vyžaduje genotoxicitu, ponúkame niekoľko typov testov, medzi ktoré patrí Amesova mutagenita, chromozomálna aberácia, myší lymfóm a mikrojadro myši, v závislosti od typu vášho produktu a požiadaviek na údaje. Tieto testy sú v súlade s usmerneniami OECD a ISO ako jedna z troch úrovní testovania genotoxicity in vitro.
Amesov test mutagenity sa používa na stanovenie potenciálnej mutagénnej aktivity extraktu zo zdravotníckej pomôcky / materiálu. Test bakteriálnej reverznej mutácie (Amesov test) sa vykonáva ako súčasť testov genotoxicity s cieľom zistiť, či sú úniky zo zdravotníckej pomôcky / materiálu mutagénne.
Test chromozomálnej aberácie sa používa na skenovanie zdravotníckych pomôcok / spotrebného materiálu s cieľom zistiť, či spôsobujú štrukturálne chromozomálne abnormality v bunkách vaječníkov čínskeho škrečka (CHO). Test sa vykonáva na zariadeniach / materiáloch s trvalým kontaktom s pacientom, dlhodobým kontaktom s pacientom alebo s krvou. Test chromozomálnej aberácie je v súlade s pokynmi OECD a ISO ako jedna z troch úrovní testovania genotoxicity in vitro.
Testovanie myšieho lymfómu často využíva bunkové kultúry cicavcov na identifikáciu génových mutácií, zmeny v štruktúre a počte chromozómov a iných toxických génov spôsobených lekárskymi prístrojmi, materiálmi alebo extraktmi. Tieto testy sa používajú na zabezpečenie toho, aby zariadenia, ktoré sú v dlhodobom kontakte s telom, neodhalili genotoxicitu, ktorá by mohla viesť k génovým mutáciám s potenciálom rakoviny.
Test Myší mikrojadro sa používa na vyhodnotenie potenciálu zdravotníckej pomôcky indukovať tvorbu mikrojadier v nezrelých polychromatických erytrocytoch nachádzajúcich sa v kostnej dreni dospelých myší.
Amesova mutagenita
V Amesovom teste mutagenity sa používa niekoľko kmeňov Salmonella typhimurium vybraných pre ich citlivosť na mutáciu z dôvodu:
Testované kmene tiež vyžadujú rast histidínu v dôsledku mutácie génu, ktorý riadi produkciu histidínu. Amesove testy sa uskutočňujú zmiešaním extraktu testovanej látky s testovaným organizmom v roztoku mäkkého agaru, ktorý obsahuje iba malé množstvo histidínu. Histidín umožňuje naočkovanému testovanému organizmu vstúpiť do obmedzeného počtu kompartmentov, je však nedostatočný na umožnenie normálneho rastu.
Ak však kmeň podlieha reverznej mutácii (spontánnej alebo vyvolanej testovanou látkou alebo materiálom pozitívnej kontroly), organizmus už nevyžaduje rast histidínu a môže produkovať viditeľnú kolóniu alebo reverzibilnú. Mutácie v testovacom organizme iba v génovej oblasti histidínu spôsobujú, že testovací organizmus zvráti mutáciu na organizmus, ktorý už histidín nevyžaduje.
Testovacie kmene sa vyberú na detekciu rôznych typov mutagénu. Použité testovacie kmene sú TA97A, TA98, TA100, TA102 a TA1535. Vykoná sa tiež spotový test, pri ktorom sa extrakty testovaného produktu zafarbia na doštičku obsahujúcu malé množstvo testovacieho organizmu obsahujúceho histidín. Keď sa testovaná látka rozšíri cez agar, stane sa viac zriedeným. To umožňuje detekciu mutagénov, ktoré spôsobujú určitú inhibíciu kmeňov testerov. Testy sa vykonávajú s aktiváciou S-9 alebo bez aktivácie S-9. Aktivačný systém S-9 je navrhnutý tak, aby simuloval systémy pečeňových enzýmov cicavcov, a používa sa na detekciu látok podliehajúcich metabolickej aktivácii z nemutagénnych foriem.
Skúška chromozomálnej aberácie sa vykonáva vystavením buniek CHO extraktu testovanej látky. Krvavé médium je zahrnuté do testu ako negatívna kontrola.
Bunky CHO sa naočkujú do baniek na kultiváciu buniek s veľkosťou 75 cm2 a inkubujú sa s médiom na kultiváciu buniek + 10% séra až do 40-60% konfluencie.
Bunky CHO sú vystavené extraktu testovaného produktu v prítomnosti a neprítomnosti systému metabolickej aktivácie. Systém metabolickej aktivácie je zmesou homogenátu S9, izocitrátu a NADP. Ako pozitívne kontroly sa používajú cyklofosfamid s metabolickou aktiváciou a mitomycín C bez metabolickej aktivácie.
Pred zberom buniek sa bunky skúmajú na cytotoxicitu. Fľaštičky sa hodnotia podľa stupňa rozlíšiteľnej morfologickej cytotoxicity na relatívnej stupnici od 10993 do 5 podľa AAMI / ANSI / ISO 87-0 a USP <4>. Priemer výsledkov z troch fliaš sa spriemeruje, aby sa získalo konečné skóre cytotoxicity.
Na konci expozičných a expresných období sú bunky zastavené v metafáze s koltazidom. Bunky sa potom odstránia z fľaštičiek a spracujú sa hypotonickým roztokom a fixátorom. Bunky sa ukladajú na podložné sklíčka mikroskopu. Chromozómy sú zafarbené Giemsovým moridlom a pokryté Permount®. Bunky sa potom mikroskopicky vyšetria na chromozomálne abnormality.
Biokompatibilita Pri testovaní genotoxicity sa bunky myšieho lymfómu používajú na stanovenie, či je testovaný materiál schopný indukovať bodové mutácie alebo klastogénne (rozbitie chromozómov) v kultivovanej bunkovej línii cicavcov. V tomto prípade je cieľový gén, tymidínkináza (TK), nahraditeľný gén. Strata aktivity TK naznačuje, že došlo k mutácii. Pretože TK je zapojený do záchrannej dráhy odvodenej z metabolizmu DNA, bunky môžu syntetizovať tymidín de novo. Strata TK preto neurobí bunku neživou.
Môžu byť vybrané mutanty a frekvencie mutantov môžu byť odvodené začlenením tymidínového analógu (trifluórtymidín alebo TFT) do kultivačného média buniek po vystavení testovanému materiálu. Bežné bunky s intaktným TK zahŕňajú analóg a templát; Mutantné bunky (bez aktivity TK) prežívajú, vytvárajú kolónie a kvantifikujú sa.
Pri teste Myší mikrojadro sa zdravotnícka pomôcka odstráni v polárnom a nepolárnom prostredí. Pozitívne kontroly a negatívne kontroly extraktu testovaného produktu sa podávajú v 20 ml / kg myšiam aj samiciam. Kostná dreň sa potom odoberie 24 a 48 hodín po podaní dávky a skúma sa na prítomnosť mikronukleárnych polychromatických erytrocytov (PCE). Prítomnosť PCE je znakom úniku mutagénnej látky zo zariadenia.
EUROLABso svojím vysoko odborným tímom a medzinárodne akreditovanými laboratóriami, Test genotoxicity Vykonáva všetky služby testovania, analýzy, merania, vyhodnocovania a generovania správ úplne a spoľahlivo.
Môžete nás požiadať, aby sme vyplnili náš formulár, aby sme dostali schôdzku, získali podrobnejšie informácie alebo požiadali o vyhodnotenie.
