EPI-200-SIT 皮膚刺激測試

「EPI-200-SIT 皮膚刺激測試」旨在根據歐盟分類系統在皮膚刺激危害識別和分類的背景下估計純測試物質的皮膚刺激潛力。由於它與歐盟和全球化學品統一分類和標籤制度 (GHS) 保持一致，因此本標準中描述的程序還允許根據 GHS 對刺激物進行危險識別。

此標準允許區分 2 類刺激物和非刺激物。所述測試方法不區分 GHS 的非必要子類別，即不區分 GHS 類別 2 和類別 3 刺激物。

EPI-200-SIT 標準中描述的方法包括將純測試化學物質局部暴露於重建的人類表皮模型中，然後進行細胞活力測試。細胞活力透過 MTT 的脫氫酶轉化來測量，MTT 存在於細胞粒線體中並轉化為藍色甲臢鹽，從組織中取出後進行定量測量。

與陰性對照（經水處理）相比，接觸化學物質的組織活力降低，用於估計皮膚刺激的可能性。最近在人類表皮模型中使用各種終點來預測局部製劑的皮膚刺激性的比較研究表明，MTT 終點甚至比基於機械的終點（例如釋放）也具有明顯的優勢。

重建的人類表皮模型由正常人源性表皮角質細胞組成，經過培養形成多層、高度分化的人類表皮模型。它由規則的基底層、多刺層和顆粒層以及含有細胞間層狀脂質層的多層角質層組成，其排列方式與活體組織中的相似。新的 OECD 測試指南中包含了重建人體皮膚模型必須符合的一般和功能條件的一般描述（“431 體外皮膚腐蝕：人體皮膚模型”和“439 體外皮膚刺激：重建人體表皮測試方法”） ”）。

表皮和培養基的所有生物成分均由製造商進行病毒、細菌、真菌和支原體污染測試。預計結果將在歷史資料庫確定的範圍內。

表皮細胞取自愛滋病毒和肝炎陰性的健康志願者。然而，生物材料的處理程序應遵循：

• 建議在處理皮膚和套件組件時戴上手套。
• 使用後，表皮、材料和與其接觸的所有介質必須在處置前進行淨化（例如，使用 10% 漂白劑、特殊容器或高壓滅菌）。

由於後孵育時間較長，測試必須在微生物安全櫃（層流罩）的無菌條件下進行。

EPI-200-SIT 皮膚刺激測試是針對化學物質（包括化妝品和藥物成分）的體外皮膚刺激測試而開發和驗證的。測試為期 60 天，包括預孵育、42 分鐘暴露、4 小時孵育後和 MTT 活力測試。組織收穫和過夜預孵育（第 0 天）後，組織局部暴露於測試化學物質（第 1 天），這些化學物質可以是液體、半固體、固體或蠟。每種測試化學物質使用三張組織，一張陽性對照（5％十二烷基硫酸鈉水溶液）和一張陰性對照。化學暴露持續 60 分鐘，其中 35 分鐘將組織置於 37 度培養箱中。然後透過大量的清洗程序將測試物質從組織表面去除。將組織插入物染色並轉移至新鮮培養基。

24 小時潛伏期（第 2 天）後，更換培養基。可以保存培養基以供進一步分析細胞激素或其他感興趣的終點。更換培養基後，將組織再孵育 18 小時。整個 42 小時孵育後（第 3 天），將組織轉移至黃色 MTT 溶液中並孵育 3 小時。

使用異丙醇萃取主要由粒線體代謝形成的紫藍色甲臢鹽 2 小時。使用分光光度計測定萃取的甲臢的光密度。如果組織活力相對於陰性對照處理的組織低於 50%，則化學物質被歸類為刺激物。該程序可完全取代體內兔子皮膚刺激測試，用於根據歐盟法規進行化學品危險識別和標籤。

在為各行業企業提供的眾多測試、測量、分析和評估研究中，我們的機構還提供「EPI-200-SIT皮膚刺激測試」標準中定義的測試服務，擁有訓練有素的專家人員和先進的技術設備。