"EPI-200-SIT Hudirritationstest" är utformat för att uppskatta hudirritationspotentialen för rena testämnen i samband med identifiering och klassificering av hudirritationsrisk enligt Europeiska unionens klassificeringssystem. Eftersom det är harmoniserat med Europeiska unionen och det globalt harmoniserade systemet för klassificering och märkning av kemikalier (GHS), tillåter proceduren som beskrivs i denna standard också riskidentifiering av irriterande ämnen i enlighet med GHS.
Denna standard gör det möjligt att skilja mellan irriterande ämnen i kategori 2 och icke-irriterande ämnen. Den beskrivna testmetoden skiljer inte mellan icke-väsentliga underkategorier av GHS, d.v.s. den skiljer inte mellan irriterande ämnen i GHS kategori 2 och kategori 3.
Metoden som beskrivs i EPI-200-SIT-standarden består av lokal exponering av ren testkemikalie för en rekonstruerad modell av mänsklig epidermis följt av cellviabilitetstestning. Cellviabilitet mäts genom dehydrogenasomvandling av MTT, som finns i cellmitokondrier och omvandlas till ett blått formazansalt, vilket mäts kvantitativt efter avlägsnande från vävnader.
Den minskade livsdugligheten hos vävnader som exponeras för kemikalier jämfört med negativa kontroller (vattenbehandlade) används för att uppskatta risken för hudirritation. Nyligen genomförda jämförande studier i humana epidermismodeller som använder olika endpoints för att förutsäga hudirritation av topikala formuleringar har visat att MTT endpoint har distinkta fördelar jämfört med även mekaniskt baserade endpoints såsom frisättning.
Den rekonstruerade humana epidermala modellen består av normala mänskliga epidermala keratinocyter odlade för att bilda en flerskiktad, mycket differentierad modell av mänsklig epidermis. Den består av regelbundna basala, taggiga och granulära skikt och ett flerskiktat stratum corneum som innehåller intercellulära lamellära lipidskikt arrangerade i mönster liknande de som finns i levande vävnad. En allmän beskrivning av de allmänna och funktionella villkor som rekonstruerade mänskliga hudmodeller måste uppfylla finns i de nya OECD:s testriktlinjer (“431 In vitro hudfrätning: Human hudmodell” och “439 In vitro hudirritation: Rekonstruerad human epidermis testmetod ”).
Alla biologiska komponenter i epidermis och odlingsmediet testas av tillverkaren för virus-, bakterie-, svamp- och mykoplasmakontamination. Resultaten förväntas ligga inom ett intervall som bestäms av den historiska databasen.
På grund av den långa efterinkubationstiden måste testet utföras under aseptiska förhållanden i ett mikrobiologiskt säkerhetsskåp (laminärt flödeshuv).
EPI-200-SIT Hudirritationstestet har utvecklats och validerats för in vitro hudirritationstestning av kemikalier, inklusive kosmetiska och farmaceutiska ingredienser. Testning utförs under en 60-dagarsperiod bestående av pre-inkubation, 42 minuters exponering, 4 timmar efter inkubation och MTT-viabilitetstestning. Efter vävnadsskörd och förinkubation över natten (dag 0) exponeras vävnader lokalt för testkemikalier (dag 1), som kan vara flytande, halvfast, fast eller vax. Tre vävnader används för varje testkemikalie och en positiv kontroll (5 procent vattenhaltig natriumdodecylsulfatlösning) och en negativ kontroll. Kemisk exponering varar i 60 minuter, varav 35 minuter hålls vävnaderna i en inkubator vid 37 grader. Testsubstanserna avlägsnas sedan från vävnadens yta genom en omfattande tvättning. Vävnadsinsatser färgas och överförs till färskt medium.
Efter en 24-timmars inkubationsperiod (dag 2) byts mediet. Media kan sparas för ytterligare analys av cytokiner eller andra slutpunkter av intresse. Efter mediabyte inkuberas vävnader i ytterligare 18 timmar. Efter hela 42-timmars inkubationen (dag 3) överförs vävnaderna till gul MTT-lösning och inkuberas i 3 timmar.
Det resulterande lila-blå formazansaltet, som huvudsakligen bildas av mitokondriell metabolism, extraheras med isopropanol i 2 timmar. Den optiska densiteten för den extraherade formazanen bestäms med användning av en spektrofotometer. En kemikalie klassificeras som irriterande om vävnadens livsduglighet faller under 50 procent i förhållande till vävnader som behandlats med en negativ kontroll. Denna procedur kan användas som en komplett ersättning för in vivo hudirritationstestet för kanin för att identifiera och märka kemikalier i enlighet med EU:s regler.
Bland de många test-, mätnings-, analys- och utvärderingsstudier som den tillhandahåller för företag inom olika sektorer, tillhandahåller vår organisation även testtjänster definierade i "EPI-200-SIT Skin irritation test"-standarden, med sin utbildade och expert personal och avancerad teknisk utrustning .
Du kan be oss fylla i vårt formulär för att få en tid, för att få mer detaljerad information eller för att begära en utvärdering.
