För biokompatibilitetstester som kräver genotoxicitet, erbjuder vi flera testtyper, inklusive Ames-mutagenicitet, kromosomavvikelse, muslymfom och musmikronukleus, beroende på din produkttyp och datakrav. Dessa tester överensstämmer med OECD och ISO-riktlinjerna som en av tre in vitro-testnivåer för genotoxicitet.
Ames-mutagenicitetstestet används för att bestämma den potentiella mutagena aktiviteten för ett extrakt från en medicinsk anordning / ett medicinskt material. Bacterial Reverse Mutation Test (Ames test) utförs som en del av genotoxicitetsbatteriet för test för att avgöra om läckage från en medicinsk anordning / material är mutagen.
Kromosomavvikelsestestet används för att skanna medicintekniska produkter / förnödenheter för att avgöra om de orsakar strukturella kromosomavvikelser i kinesiska hamsterovarieceller (CHO) -celler. Testet utförs på enheter / material med permanent patientkontakt, långvarig patientkontakt eller blodkontakt. Kromosomavvikelsestestet överensstämmer med OECD- och ISO-riktlinjerna som en av tre nivåer av in vitro-testning för genotoxicitet.
Mus lymfom testning använder ofta däggdjurscellkulturer för att identifiera genmutationer, förändring i kromosomstruktur och antal och andra gentoxiciteter orsakade av medicinsk utrustning, material eller extrakt. Dessa tester används för att säkerställa att enheter som har långvarig kontakt med kroppen inte avslöjar genotoxicitet som kan leda till genmutationer med cancerpotential.
Musmikronukleusanalysen används för att utvärdera potentialen hos en medicinsk anordning för att inducera mikronukleusbildning i omogna polykromatiska erytrocyter som finns i benmärgen hos vuxna möss.
Ames mutagenicitet
Ames mutagenicitetstest använder flera Salmonella typhimurium-stammar som valts för deras mottaglighet för mutation på grund av:
Teststammar kräver också histidin för tillväxt på grund av en mutation i genen som kontrollerar histidinproduktion. Ames-tester utförs genom att blanda ett extrakt av testsubstansen med testorganismen i en mjuk agarlösning som endast innehåller en liten mängd histidin. Histidin tillåter den inokulerade testorganismen att komma in i ett begränsat antal fack, men är otillräcklig för att tillåta normal tillväxt.
Men om stammen genomgår en omvänd mutation (spontan eller inducerad av testsubstansen eller ett positivt kontrollmaterial) behöver inte organismen längre histidin växa och kan producera en synlig koloni eller reverserare. Mutationer i testorganismen endast i histidingenregionen får testorganismen att vända mutationen till en organism, som inte längre kräver histidin.
Teststammar väljs för att detektera olika typer av mutagen. Teststammar som används är TA97A, TA98, TA100, TA102 och TA1535. Ett fläckprov utförs också i vilket extrakt av testprodukten färgas på en platta innehållande en liten mängd histidininnehållande testorganism. När testsubstansen diffunderar genom agaren blir den mer utspädd. Detta möjliggör detektering av mutagener som orsakar viss hämning av teststammarna. Tester görs med S-9-aktivering eller utan S-9-aktivering. S-9-aktiveringssystemet är utformat för att simulera däggdjursleverenzymsystem och används för att detektera ämnen som genomgår metabolisk aktivering från icke-mutagena former.
Kromosomavvikelsestestet utförs genom att CHO-celler utsätts för testämnextraktet. Ett blödningsmedium ingår i analysen som en negativ kontroll.
CHO-celler ympas i 75 cm2 cellodlingskolvar och inkuberas med cellodlingsmedium + 10% serum tills 40-60% sammanflöde.
CHO-celler exponeras för testproduktextraktet i närvaro och frånvaro av ett metaboliskt aktiveringssystem. Det metaboliska aktiveringssystemet är en blandning av S9-homogenat, isocitrat och NADP. Positiva kontroller som används är cyklofosfamid med metabolisk aktivering och Mitomycin C utan metabolisk aktivering.
Före cellskörd undersöks celler för cytotoxicitet. Flaskor görs enligt graden av urskiljbar morfologisk cytotoxicitet i en relativ skala av 10993 - 5 enligt AAMI / ANSI / ISO 87-0 och USP <4>. Genomsnittet av resultaten från de tre flaskorna beräknas i genomsnitt för att ge en slutlig cytotoxicitetspoäng.
I slutet av exponerings- och uttrycksperioderna arresteras celler med koltazid i metafasen. Cellerna avlägsnas sedan från flaskorna och behandlas med en hypoton lösning och fixeringsmedel. Celler deponeras på objektglas. Kromosomerna färgas med Giemsa-fläck och täcks av Permount®. Cellerna undersöks sedan mikroskopiskt med avseende på kromosomavvikelser.
Biokompatibilitet Vid genotoxicitetstestning används muslymfomceller för att bestämma om ett testmaterial kan inducera punktmutationer eller klastogena (kromosomala brott) i en odlad däggdjurscellinje. I detta fall är målgenen, tymidinkinas (TK), en distribuerbar gen. Förlust av TK-aktivitet indikerar att en mutation har inträffat. Eftersom TK är involverad i en räddningsväg som härrör från DNA-metabolism kan celler syntetisera tymidin de novo. Därför gör förlust av TK inte cellen livlös.
Mutanter kan väljas och mutantfrekvenser kan härledas genom att införliva tymidinanalogen (trifluortymidin eller TFT) i odlingsmediet i cellerna efter exponering för testmaterialet. Vanliga celler med intakt TK inkluderar analog och mall; Mutantceller (saknar TK-aktivitet) överlever, bildar kolonier och kvantifierar.
I Mus Micronucleus-testet avlägsnas en medicinsk anordning i en polär och opolär miljö. Testproduktextrakt positiva kontroller och negativa kontroller administreras vid 20 ml / kg hos både han- och honmöss. Benmärg skördas sedan 24 och 48 timmar efter dosering och undersöks med avseende på närvaron av mikronukleära polykromatiska erytrocyter (PCE). Förekomsten av PCE är en indikation på att det mutagena ämnet läcker ut från enheten.
EUROLAB, med sitt mycket expertteam och internationellt ackrediterade laboratorier, Genotoxicitetstest utför alla test-, analys-, mät-, utvärderings- och rapportgenereringstjänster på ett komplett och pålitligt sätt.
Du kan be oss fylla i vårt formulär för att få en tid, för att få mer detaljerad information eller för att begära en utvärdering.
