ASTM E2197-17 Standardmethode für quantitative Scheibenträgertests zur Bestimmung der bakteriziden, viruziden, fungiziden, mykobakteriziden und sporiziden Wirkung von Chemikalien

In der von der American Society for Testing and Materials (ASTM) entwickelten Norm „ASTM E2197-17 Standard quantitative Datenträgertestmethode zur Bestimmung der bakteriziden, viruziden, fungiziden, mykobakteriziden und sporiziden Aktivitäten von Chemikalien“ steht gebürsteter Edelstahl für hart, nicht -poröse Umweltoberflächen und medizinische Geräte zur Bewertung der Fähigkeit, vegetative Bakterien, Viren, Pilze, Mykobakterien und Bakteriensporen auf Bandscheibenträgern zu inaktivieren. Eine verwendete Testmethode wird beschrieben.

Dieser Standard dient auch dazu, Überlebende mit dem Durchschnitt von mindestens drei Kontrollträgern zu vergleichen, um festzustellen, ob der Leistungsstandard erfüllt wurde. Für eine ordnungsgemäße statistische Auswertung der Ergebnisse muss die Anzahl lebensfähiger Organismen im Testinokulum hoch genug sein, um sowohl den Leistungsstandard als auch experimentelle Abweichungen in den Ergebnissen zu berücksichtigen. Darüber hinaus ist bei dieser Testmethode kein Wischen oder Reiben erforderlich. Daher ist es nicht zum Testen von Löschungen gedacht.

Für die Zwecke dieser Norm gelten zusätzlich zu den Begriffen und Definitionen in „ASTM E2756-19 Standardterminologie für antimikrobielle und antivirale Wirkstoffe“ die folgenden Definitionen:

• Ein Träger bezieht sich auf eine unbelebte Oberfläche oder einen unbelebten Gegenstand, der mit dem Testorganismus beimpft ist.
• Unter Eluat versteht man ein Elutionsmittel, das den oder die gewonnenen Organismen enthält.
• Unter Elutionsmittel versteht man jede Lösung, die für den oder die Testorganismen unschädlich ist und einem Träger zugesetzt wird, um den oder die Testorganismen zu gewinnen.
• Unter Neutralisierung versteht man den Prozess der Unterdrückung der antimikrobiellen Aktivität einer Testsubstanz. Dies kann durch Verdünnung oder Zugabe eines oder mehrerer chemischer Neutralisatoren zum Gemisch aus Organismen oder Testsubstanzen erreicht werden.
• Eine Bodenladung ist eine Lösung aus einer oder mehreren organischen oder anorganischen Substanzen oder beiden, die der Suspension des Testorganismus zugesetzt wird, um das Vorhandensein von Körpersekreten, Ausscheidungen oder anderen Fremdstoffen zu simulieren.
• Ein Testorganismus ist ein Organismus, der Eigenschaften aufweist, die eine einfache Identifizierung ermöglichen. Es kann auch als Ersatzorganismus, Simulanzorganismus oder Markerorganismus bezeichnet werden.
• Bei der Testsubstanz handelt es sich um eine Formulierung mit antimikrobiellen Inhaltsstoffen.

Jede Scheibe (1 cm Durchmesser) enthält 10 µL Testorganismus mit einer Ladung Erde. Das Inokulum wird getrocknet und die Scheibe wird dann auf die innere Bodenfläche eines sterilen Plastikfläschchens gelegt, bevor sie mit 50 µL der Gebrauchsverdünnung der Testsubstanz in Kontakt kommt. Kontaktzeit und Temperatur können je nach Bedarf variiert werden. Kontrollträger erhalten 50 µL Flüssigkeit, die für Testorganismen und Wirtszellen (falls vorhanden) harmlos ist, werden ansonsten jedoch auf die gleiche Weise wie Testträger gehandhabt.

Bei Tests gegen vegetative Bakterien, Pilze, Mykobakterien und Bakteriensporen wird die Testsubstanz anschließend neutralisiert und das Inokulum eluiert. Das Eluat und die anschließenden Spülungen des Trägers und des Fläschchens werden durch den Membranfilter geleitet. Filterkulturplatten werden inkubiert, Kolonien gezählt und log10-Reduktionen berechnet.

Für Virustests werden geeignete Verdünnungen des Eluats in geeignete Zellkulturen inokuliert, die Kulturen werden auf Zytopathologie/Infektionsherde untersucht, die als die wahrscheinlichste Anzahl geschätzt oder als Herde oder Plaques gezählt werden, und log10 wird berechnet.

Das Design dieses Tests eliminiert jeglichen Verlust lebensfähiger Organismen durch Waschen und ermöglicht so die Erstellung statistisch gültiger Daten mit viel weniger Testträgern, als dies für Methoden erforderlich wäre, die auf einfachen Schätzungen der wahrscheinlichsten Anzahl basieren.

Die Genauigkeit der Tests wird durch die Verwendung einer Bodenbelastung, die Mikrotopographie der Trägeroberfläche aus gebürstetem Edelstahl und das kleinere Verhältnis von Testsubstanz zu Oberfläche erreicht, das für viele Desinfektionsanwendungen typisch ist. Daher steht die zu bewertende Testsubstanz vor einer angemessenen Herausforderung, wenn es darum geht, eine effiziente Rückgewinnung der Testorganismen aus inokulierten Trägern zu ermöglichen. Auch die Metallplättchen im Basistest sind mit einer Vielzahl von Wirkstoffen verträglich.

Das Design der Träger ermöglicht es, jeweils ein genau abgemessenes Volumen des Testorganismus (10 µL) und der Kontrollflüssigkeit oder Testsubstanz (50 µL) zu platzieren.

Das Inokulum wird in der Mitte jeder Scheibe platziert, während Volumina der Testsubstanz nahezu die gesamte Scheibenoberfläche bedecken, wodurch das Risiko einer Exposition gegenüber Organismen praktisch ausgeschlossen ist.

Bei allen Tests außer denen gegen Viren führt die Zugabe von 10 ml Eluent/Verdünnungsmittel unmittelbar am Ende der Kontaktzeit zu einer 1:200-Verdünnung der Testsubstanz. Während dieser Schritt allein ausreicht, um die mikrobizide Aktivität der meisten Wirkstoffe zu stoppen, ermöglicht das Testprotokoll bei Bedarf die Zugabe eines spezifischen Neutralisators zum Eluenten/Verdünnungsmittel. Mit Ausnahme von Viren ermöglicht der Membranfiltrationsschritt auch die Aufbereitung des gesamten Eluats der Testträger und damit die Erfassung und anschließende Detektion auch geringer Mengen eventuell vorhandener lebensfähiger Organismen. Durch anschließendes Spülen der Membranfilter mit Kochsalzlösung wird außerdem das Risiko verringert, dass Inhibitorrückstände in das Rückgewinnungsmedium gelangen.

Unter den zahlreichen Test-, Mess-, Analyse- und Bewertungsstudien, die für Unternehmen in verschiedenen Branchen durchgeführt wurden, hat unser Unternehmen mit seinem geschulten und fachkundigen Personal und seiner fortschrittlichen technologischen Ausrüstung die „ASTM E2197-17 Standard-Quantitätsscheibe zur Bestimmung der bakteriziden, viruziden, fungizide, mykobakterizide und sporizide Aktivitäten von Chemikalien". Es bietet auch Testdienstleistungen an, die in der Norm „Trägertestmethode" definiert sind.