Der Standard „OECD TG 442E In-vitro-Hautsensibilisierung – Aktivierungstest menschlicher Zelllinien (h-CLAT)“, der im Rahmen der OECD-Leitlinien für verantwortungsvolles Geschäftsgebaren multinationaler Unternehmen (OECD-Leitlinien) veröffentlicht wurde, soll sich mit der Aktivierung dendritischer Zellen befassen, einem Schlüsselereignis im unerwünschten Ergebnispfad einer Hautsensibilisierung.
Diese Prüfrichtlinie befasst sich mit dem Endpunkt Hautsensibilisierung als Gefährdung für die menschliche Gesundheit nach Kontakt mit einer Prüfchemikalie. Unter Hautsensibilisierung versteht man eine allergische Reaktion nach Hautkontakt mit der Prüfchemikalie gemäß der Definition des Global Harmonisierten Systems zur Einstufung und Kennzeichnung von Chemikalien der Vereinten Nationen.
Dieser Standard bietet vier In-vitro-Testmethoden, die sich mit demselben Schlüsselereignis im negativen Ergebnispfad befassen:
Alle diese Methoden dienen der Unterscheidung zwischen Hautsensibilisatoren und Nichtsensibilisatoren gemäß dem Global Harmonisierten System zur Einstufung und Kennzeichnung von Chemikalien der Vereinten Nationen. Die in diesem Testleitfaden beschriebenen Testmethoden quantifizieren Veränderungen in der Expression einer Reihe von Genen, die mit dem Aktivierungsprozess von Monozyten und dendritischen Zellen (genomische Biomarkersignatur) nach Exposition gegenüber Zelloberflächenmarkern oder Sensibilisatoren verbunden sind.
Der OECD-Standard TG 442E ist ein robuster In-vitro-Test zur Identifizierung potenzieller chemischer Hautsensibilisatoren mit breiter Anwendbarkeit und einer Vorhersagegenauigkeit von über 90 Prozent. Dieser Test liefert eine binäre Vorhersage, die Testproben als hautsensibilisierend oder nicht hautsensibilisierend klassifiziert. Ziel dieser Richtlinie ist es, ohne Tierversuche festzustellen, ob eine chemische Substanz durch Aktivierung spezifischer Immunreaktionen eine Hautsensibilisierung, d. h. eine allergische Kontaktdermatitis, verursachen kann.
Der humane Zelllinienaktivierungstest (h-CLAT) ist ein In-vitro-Test (ohne Tierversuche), mit dem festgestellt werden kann, ob eine Chemikalie eine Hautsensibilisierung auslösen kann. Eine Hautsensibilisierung ist eine allergische Reaktion, die durch eine Überreaktion des Immunsystems auf eine Substanz nach Hautkontakt verursacht wird. Der h-CLAT soll einen wichtigen biologischen Schritt bei der Entstehung einer Hautsensibilisierung modellieren: die Aktivierung dendritischer Zellen (eine Art Immunzelle) durch eine sensibilisierende Chemikalie.
Diese Testmethode ist wichtig, da sie ältere Tierversuche ersetzt. Darüber hinaus wird der OECD-Standard TG 442E geschätzt, da er standardisierte, wissenschaftlich validierte und international anerkannte Methoden zur Beurteilung bietet, ob Chemikalien eine Hautsensibilisierung verursachen, eine Art allergischer Reaktion, die durch wiederholten Hautkontakt hervorgerufen wird.
Die h-CLAT-Methode quantifiziert Veränderungen in der Expression von Zelloberflächenmarkern, die mit dem Aktivierungsprozess von Monozyten und dendritischen Zellen in der menschlichen Monozytenleukämiezelllinie THP-1 nach Exposition gegenüber Sensibilisatoren assoziiert sind. Die gemessenen Expressionsniveaus dendritischer Zelloberflächenmarker werden dann zur Unterscheidung zwischen Hautsensibilisatoren und -desensibilisatoren verwendet.
Bei dieser Methode handelt es sich um einen In-vitro-Test, der Veränderungen der Expression von Zelloberflächenmarkern in THP-1-Zellen der menschlichen Monozytenleukämie-Zelllinie nach 24-stündiger Exposition gegenüber einer Testchemikalie misst. Diese Oberflächenmoleküle sind typische Marker der Aktivierung von Monozyten-THP-1 und können die Aktivierung dendritischer Zellen nachahmen, die eine entscheidende Rolle bei der T-Zell-Priming spielen. Veränderungen der Expression von Oberflächenmarkern werden nach Zellfärbung mit fluorochrommarkierten Antikörpern mittels Durchflusszytometrie gemessen. Gleichzeitig wird die Zytotoxizität gemessen, um zu beurteilen, ob eine Hochregulierung der Expression von Oberflächenmarkern bei subzytotoxischen Konzentrationen auftritt. Die relative Fluoreszenzintensität von Oberflächenmarkern im Vergleich zur Lösungsmittel-/Vehikelkontrolle wird berechnet und im Vorhersagemodell verwendet, um die Unterscheidung zwischen Sensibilisatoren und Nicht-Sensibilisatoren zu unterstützen.
Kurz gesagt: Die OECD-Richtlinie 442 ist von entscheidender Bedeutung für die Unterstützung ethischer, zuverlässiger und weltweit einheitlicher Sicherheitstests von Chemikalien und Verbraucherprodukten, insbesondere angesichts sich entwickelnder Vorschriften und der öffentlichen Forderung nach tierversuchsfreier Wissenschaft.
Unsere Organisation, die seit Jahren Unternehmen aller Branchen durch ein breites Spektrum an Test-, Mess-, Analyse- und Bewertungsaktivitäten unterstützt, verfügt über ein starkes Team von Mitarbeitern, die die globalen Entwicklungen in Wissenschaft und Technologie aufmerksam verfolgen und sich ständig weiterentwickeln. In diesem Zusammenhang bieten wir Unternehmen auch Testdienstleistungen gemäß dem OECD TG 442E In-vitro-Hautsensitivitätstest – Aktivierungstest für menschliche Zelllinien (h-CLAT)-Standard an.
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