Die Norm „OECD TG 431 In-vitro-Hautirritation: Testverfahren mit rekonstruierter menschlicher Epidermis (RHE)“, veröffentlicht im Rahmen der OECD-Leitlinien für verantwortungsvolles unternehmerisches Handeln multinationaler Unternehmen (OECD-Leitlinien) , beschreibt ein Testverfahren zur Identifizierung ätzender Chemikalien und Gemische. Unterstützt durch eine Gewichtung der Evidenz unter Einbeziehung weiterer verfügbarer Informationen ermöglicht es zudem die Identifizierung nicht ätzender Substanzen und Gemische. Dieses Testprotokoll verdeutlicht außerdem die Unterscheidung zwischen stark und schwach hautätzenden Stoffen. Für die Beurteilung der Hautätzung ist bei diesem Testverfahren keine Verwendung von lebenden Tieren oder tierischem Gewebe erforderlich.
-test-yontemi.jpg "OECD TG 431 In-vitro-Hautreizung: Testmethode mit rekonstruierter menschlicher Epidermis (RhE).")
Unter Hautätzung versteht man die Entstehung irreversibler Hautschäden, die sich nach der Anwendung einer Prüfchemikalie als sichtbare Nekrose von der Epidermis bis zur Dermis äußern. Der OECD-Standard TG 431 stellt ein In-vitro-Verfahren bereit, das die Identifizierung nicht korrosiver und ätzender Stoffe und Gemische gemäß dem weltweit harmonisierten System zur Klassifizierung und Kennzeichnung von Chemikalien ermöglicht. Es ermöglicht auch eine teilweise Unterkategorisierung von Schleifmitteln.
Zur Beurteilung des hautätzenden Potenzials von Chemikalien wurden häufig Versuchstiere eingesetzt. Zusätzlich zum OECD TG 431-Standard wurden jedoch auch die OECD TG 430- und OECD TG 435-Standards validiert und für die Prüfung des Korrosionspotenzials von Chemikalien akzeptiert. Darüber hinaus wurde der In-vitro-Standard OECD TG 439 entwickelt, um das Hautreizungspotenzial zu testen. Ein Dokument zu integrierten Test- und Bewertungsansätzen für Hautätzung und -reizung, das Informationsquellen und Analysetools gruppiert und Anleitungen zur Integration und Verwendung vorhandener Test- und Nichttestdaten zur Bewertung der Hautreizung und des Hautätzungspotenzials von Chemikalien bietet wenn weitere Tests erforderlich sind, werden mehrere Module beschrieben, die einen Ansatz vorschlagen.
Diese Norm befasst sich mit dem Endpunkt Hautverätzung für die menschliche Gesundheit. Es verwendet rekonstruierte menschliche Epidermis (RhE) (abgeleitet aus untransformierten epidermalen Keratinozyten menschlichen Ursprungs), die die histologischen, morphologischen, biochemischen und physiologischen Eigenschaften der oberen Teile der menschlichen Haut, also der Epidermis, genau nachahmt.
Der OECD TG 431-Standard umfasst fünf validierte Testmethoden unter Verwendung kommerziell erhältlicher RhE-Modelle.
Bei der Durchführung dieses Tests wird die Prüfchemikalie topisch auf ein dreidimensionales RhE-Modell aufgetragen, das aus kultivierten, nicht transformierten, vom Menschen stammenden epidermalen Keratinozyten besteht, um ein mehrschichtiges, hochdifferenziertes Modell der menschlichen Epidermis zu erstellen. Es besteht aus regelmäßigen Basal-, Stachel- und Körnerschichten und einem mehrschichtigen Stratum corneum, das interzelluläre lamellare Lipidschichten enthält, die wichtige Lipidklassen darstellen, die denen in vivo ähneln.
Für jede Behandlung (Expositionszeit) und Kontrollen werden zwei Gewebereplikate verwendet. Ätzende Stoffe werden nach ihrer Fähigkeit definiert, bei bestimmten Expositionszeiten eine Verringerung der Zelllebensfähigkeit unter definierte Schwellenwerte zu bewirken. Farbige Chemikalien können auch mit einem HPLC-Verfahren (Hochleistungsflüssigkeitschromatographie) getestet werden. Das Prinzip der Testmethode am menschlichen Hautmodell basiert auf der Annahme, dass ätzende Chemikalien durch Diffusion oder Erosion in das Stratum Corneum eindringen können und für die darunter liegenden Zellschichten zytotoxisch sind. Die Zelllebensfähigkeit wird durch die enzymatische Umwandlung des lebenswichtigen Farbstoffs MTT in ein blaues Formazansalz gemessen, das nach Entfernung aus dem Gewebe quantitativ gemessen wird. Es hat sich gezeigt, dass RhE-basierte Hautreizungstestmethoden in vivo Hautreizungseffekte nachweisen können, die bei Kaninchen gemäß dem OECD TG 404-Standard bewertet wurden.
Vor der routinemäßigen Verwendung einer der fünf validierten RhE-Testmethoden, die dieser Norm entsprechen, müssen Labore ihre Kompetenz nachweisen, indem sie die vorgeschlagenen Kompetenzelemente gemäß dieser Norm korrekt klassifizieren. Wenn eine Methode zur Unterkategorisierung verwendet wird, muss auch die korrekte Unterkategorisierung angezeigt werden. Wenn ein gelisteter Stoff nicht verfügbar oder gerechtfertigt ist, kann ein anderer Stoff verwendet werden, für den ausreichende In-vivo- und In-vitro-Referenzdaten verfügbar sind.
Die in dieser Norm beschriebenen Prüfmethoden sind:
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