Til biokompatibilitetstest, der kræver gentoksicitetstest, tilbyder vi flere testtyper, herunder Ames-mutagenicitet, kromosomafvigelse, muselymfom og musemikronukleus, afhængigt af din produkttype og datakrav. Disse tests overholder OECD- og ISO-retningslinjerne som et af tre in vitro-testniveauer for genotoksicitet.
Ames-mutagenicitetstesten bruges til at bestemme den potentielle mutagene aktivitet af et ekstrakt fra et medicinsk udstyr / materiale. Bakteriel revers mutationstest (Ames-test) udføres som en del af genotoksicitetsbatteriet af test for at bestemme, om lækager fra et medicinsk udstyr / materiale er mutagene.
Kromosomafvigelsestesten bruges til at scanne medicinsk udstyr / forsyninger for at afgøre, om de forårsager strukturelle kromosomafvigelser i celler fra kinesisk hamsterovn (CHO). Testen udføres på enheder / materialer med permanent patientkontakt, langvarig patientkontakt eller blodkontakt. Kromosomafvigelsestesten overholder OECD- og ISO-retningslinjerne som et af tre niveauer af in vitro-test for genotoksicitet.
Mus-lymfom-test bruger ofte pattedyrcellekulturer til at identificere genmutationer, ændring i kromosomstruktur og antal og andre gentoksiciteter forårsaget af medicinsk udstyr, materiale eller ekstrakter. Disse tests bruges til at sikre, at apparater, der har langvarig kontakt med kroppen, ikke afslører genotoksicitet, der kan føre til genmutationer med kræftpotentiale.
Mouse Micronucleus assay bruges til at evaluere potentialet for et medicinsk udstyr til at inducere micronucleus-dannelse i umodne polykromatiske erythrocytter, der findes i knoglemarven hos voksne mus.
Ames mutagenicitet
Ames-mutagenicitetstesten anvender flere Salmonella typhimurium-stammer, der er valgt for deres modtagelighed for mutation på grund af:
Teststammer kræver også histidin til vækst på grund af en mutation i genet, der styrer histidinproduktion.
Ames-test udføres ved at blande et ekstrakt af teststoffet med testorganismen i en blød agaropløsning, der kun indeholder en lille mængde histidin. Histidin tillader den podede testorganisme at komme ind i et begrænset antal rum, men er utilstrækkelig til at tillade normal vækst.
Men hvis stammen gennemgår en omvendt mutation (spontan eller induceret af teststoffet eller et positivt kontrolmateriale), behøver organismen ikke længere histidin at vokse og kan producere en synlig koloni eller reverser. Mutationer i testorganismen kun i histidingenegionen får testorganismen til at vende mutation til en organisme, som ikke længere kræver histidin.
Teststammer er valgt til at detektere forskellige typer mutagen. De anvendte teststammer er TA97A, TA98, TA100, TA102 og TA1535.
En pletstest udføres også, hvor ekstrakter af testproduktet farves på en plade, der indeholder en lille mængde histidinholdig testorganisme. Når teststoffet diffunderer gennem agaren, bliver det mere fortyndet. Dette muliggør påvisning af mutagener, der forårsager en vis hæmning af teststammerne. Test udføres med S-9-aktivering eller uden S-9-aktivering. S-9-aktiveringssystemet er designet til at simulere leverenzymsystemer hos pattedyr og bruges til at detektere stoffer, der gennemgår metabolisk aktivering fra ikke-mutagene former.
Kromosomafvigelsestesten udføres ved at udsætte CHO-cellerne for teststofekstraktet. Et blødningsmedium er inkluderet i analysen som negativ kontrol.
CHO-celler podes i 75 cm2 cellekulturkolber og inkuberes med cellekulturmedium + 10% serum indtil 40-60% sammenløb.
CHO-celler udsættes for testproduktekstrakten i nærvær og fravær af et metabolisk aktiveringssystem. Det metaboliske aktiveringssystem er en blanding af S9-homogenat, isocitrat og NADP. Positive anvendte kontroller er cyclofosfamid med metabolisk aktivering og Mitomycin C uden metabolisk aktivering.
Før cellehøst undersøges celler for cytotoksicitet. Hætteglas scorer i henhold til graden af skelnen mellem morfologisk cytotoksicitet på en relativ skala fra 10993 - 5 ifølge AAMI / ANSI / ISO 87-0 og USP <4>. Gennemsnittet af resultaterne fra de tre flasker er gennemsnit for at give en endelig cytotoksicitetsscore.
I slutningen af eksponerings- og ekspressionsperioderne arresteres celler i metafase med coltazid. Cellerne fjernes derefter fra hætteglassene og behandles med en hypotonisk opløsning og fikseringsmiddel. Celler deponeres på objektglas. Kromosomerne er farvet med Giemsa-plet og dækket med Permount. Cellerne undersøges derefter mikroskopisk for kromosomale abnormiteter.
Biokompatibilitet I genotoksicitetstesten anvendes muselymfomaceller til at bestemme, om et testmateriale er i stand til at inducere punktmutationer eller clastogent (kromosomalt brud) i en dyrket pattedyrscellelinie. I dette tilfælde er målgenet, thymidinkinase (TK), et distribuerbart gen. Tab af TK-aktivitet indikerer, at der er sket en mutation. Da TK er involveret i en redningsvej for thymidin afledt af DNA-metabolisme, kan celler syntetisere thymidin de novo. Derfor gør tab af TK ikke cellen livløs.
Mutanter kan vælges, og mutante frekvenser kan afledes ved at inkorporere thymidinanalogen (trifluorthymidin eller TFT) i dyrkningsmediet i cellerne efter eksponering for testmaterialet. Regelmæssige celler med intakt TK inkluderer analog og skabelon; Mutantceller (mangler TK-aktivitet) overlever, danner kolonier og kvantificerer.
I Mouse Micronucleus-testen fjernes et medicinsk udstyr i et polært og ikke-polært miljø. Testkontrolekstrakt positive kontroller og negative kontroller administreres ved 20 ml / kg i både han- og hunmus. Knoglemarv høstes derefter 24 og 48 timer efter dosering og undersøges for tilstedeværelsen af mikronukleære polychromatiske erytrocytter (PCE'er). Tilstedeværelsen af PCE'er er en indikation af, at det mutagene stof lækker fra enheden.
EUROLAB, med sit yderst eksperthold og internationalt akkrediterede laboratorier, Genotoksicitetstest Den udfører alle test-, analyse-, måle-, evaluerings- og rapportgenereringstjenester fuldstændigt og pålideligt.
Du kan bede os om at udfylde vores formular for at få en aftale, for at få mere detaljerede oplysninger eller for at anmode om en evaluering.
