Die Norm USP 61 „Mikrobiologische Untersuchung nicht steriler Produkte – Keimzahlbestimmungen“ des Amerikanischen Arzneibuchs (USP) beschreibt standardisierte Verfahren zur quantitativen Bestimmung lebensfähiger Mikroorganismen in nicht sterilen Arzneimitteln und anderen Materialien, auf die diese Norm anwendbar ist. Sie umfasst auch eine Methode zur Zählung mesophiler Bakterien und Pilze, die unter aeroben Bedingungen wachsen können.
Der Zweck des USP-61-Standards besteht nicht einfach darin, das Vorhandensein oder Fehlen von Mikroorganismen festzustellen. Vielmehr bietet er ein kontrolliertes und reproduzierbares Verfahren zur Bestimmung der Keimzahl und zur Bewertung, ob ein Produkt eine definierte mikrobiologische Qualitätsspezifikation erfüllt.
Diese Norm beschreibt die Prüfung von Arzneimitteln zur Bestimmung ihrer antimikrobiellen Aktivität. Ziel der Prüfung ist der Nachweis, dass das zur Zählung von Mikroorganismen verwendete Medium geeignet ist.
Nicht sterile Arzneimittel müssen nicht vollständig frei von Mikroorganismen sein, jedoch muss ihre Keimbelastung angemessen kontrolliert werden. Eine übermäßige mikrobielle Kontamination kann zu Produktverderb führen, die Wirksamkeit beeinträchtigen und potenziell Risiken für Patienten bergen.
Daher bietet der USP 61-Standard ein standardisiertes mikrobiologisches Zählverfahren, das bei der Qualitätskontrolle, der Prüfung von Fertigprodukten, Produktionsuntersuchungen und der mikrobiologischen Qualitätsbewertung eingesetzt werden kann.
Dieser Standard ist besonders wichtig, da mikrobiologische Ergebnisse stark von der Probenvorbereitung, den Kulturbedingungen, der Mikroorganismen-Nachweisrate und der Zählmethode beeinflusst werden können. Die Standardisierung dieser Faktoren erhöht die Zuverlässigkeit und Vergleichbarkeit der Testergebnisse.
Der USP-61-Standard legt in erster Linie die Menge an lebenden aeroben mesophilen Mikroorganismen fest, einschließlich:
Die Tests sind quantitativ, das Ergebnis wird also als Keimzahl angegeben und nicht einfach als „nachgewiesen“ oder „nicht nachgewiesen“. Daher unterscheidet sich der USP-61-Standard vom USP-62-Standard. Während sich der USP-62-Standard mit dem Nachweis bestimmter Mikroorganismen befasst, konzentriert sich der USP-61-Standard auf die Zählung.
Das Grundprinzip besteht darin, die Produktprobe ordnungsgemäß vorzubereiten, eine geeignete Menge der vorbereiteten Probe in oder auf ein geeignetes mikrobiologisches Nährmedium zu geben, unter festgelegten Bedingungen zu inkubieren und anschließend die wachsenden Kolonien zu zählen. Je nach Art des Produkts können unterschiedliche Zählmethoden geeignet sein. Gängige Verfahren sind:
Die gewählte Methode muss für das Produkt geeignet sein. Einige Arzneimittel können das mikrobielle Wachstum hemmen, wodurch eine direkte Zählung unzuverlässig wird, sofern das Produkt nicht ordnungsgemäß verdünnt, neutralisiert oder anderweitig behandelt wird.
Einer der wichtigsten Aspekte des USP-61-Standards ist der Nachweis, dass das gewählte Testverfahren tatsächlich Mikroorganismen aus dem Produkt nachweisen kann. Ein Produkt kann antimikrobielle Wirkstoffe, Konservierungsmittel, einen zu hohen pH-Wert, hohe Salzkonzentrationen oder andere Eigenschaften enthalten, die das mikrobielle Wachstum hemmen. Werden diese Faktoren nicht berücksichtigt, kann der Test eine fälschlich niedrige Keimzahl ergeben.
Abschließend wird die Eignung der Zählmethode anhand geeigneter Testmikroorganismen und Kontrollen bewertet. Ziel ist es, nachzuweisen, dass Mikroorganismen unter den gewählten Testbedingungen aus dem Produkt gewonnen werden können. Dies ist ein zentrales Qualitätskontrollkonzept: Niedrige Keimzahlen sind nur dann aussagekräftig, wenn die Testmethode eine ausreichende Nachweisbarkeit gewährleistet.
Das im Test verwendete Kulturmedium muss das Wachstum der zu testenden Mikroorganismen ermöglichen. Daher beinhaltet der USP-61-Standard einen Wachstumstest als Teil der mikrobiologischen Kontrolle. Dieser Test dient dem Nachweis, dass das Kulturmedium für die Anzucht von Mikroorganismen geeignet ist. Zur Prüfung des Mediums werden geeignete Referenzmikroorganismen verwendet und deren Wachstumsfähigkeit unter festgelegten Bedingungen bewertet. Dies hilft, eine tatsächlich geringe Keimzahl von einem schlechten Ergebnis aufgrund eines ungeeigneten oder fehlerhaften Kulturmediums zu unterscheiden.
Negativkontrollen sind ebenfalls ein wichtiger Bestandteil des Verfahrens. Sie dienen dem Nachweis, dass das Testsystem, die Umgebung, die Geräte und die Prozessabläufe nicht kontaminiert sind. Wachsen Mikroorganismen in einer geeigneten Negativkontrolle, muss die Gültigkeit des Tests überprüft werden. Daher ist der USP-61-Standard nicht nur ein Verfahren zur Koloniezählung. Er umfasst Kontrollen, die die technische Aussagekraft des mikrobiologischen Ergebnisses belegen sollen.
Die Probenvorbereitung hängt maßgeblich von den physikalischen und chemischen Eigenschaften des Produkts ab. Beispiele hierfür sind:
Ziel ist es, eine repräsentative Probe zu gewinnen und dabei Bedingungen zu vermeiden, die die mikrobielle Ausbeute künstlich erhöhen oder verringern.
Nach der Inkubation werden die mikrobiellen Kolonien gezählt und das Ergebnis anhand der getesteten Produktmenge und der angewandten Verdünnungs- oder Filtrationsbedingungen berechnet. Die Ergebnisse können wie folgt als mikrobielle Keimzahlen ausgedrückt werden:
Das Ergebnis wird dann mit den für das jeweilige Produkt geltenden mikrobiologischen Akzeptanzkriterien verglichen.
Wichtig ist, dass der USP-61-Standard selbst in erster Linie eine Testmethode darstellt. Der zulässige mikrobiologische Grenzwert wird durch die jeweilige Monographie, Spezifikation, behördliche Anforderung oder andere geeignete Qualitätsnormen bestimmt und ist nicht automatisch für jedes Produkt gleich.
Der USP-61-Standard bezieht sich primär auf nicht sterile Arzneimittel, einschließlich geeigneter Fertigprodukte, Rohstoffe und anderer pharmazeutischer Hilfsstoffe, für die dieser Abschnitt gilt. Er kann auch auf andere regulierte Produkte und Anwendungen Anwendung finden. Beispielsweise führt die FDA diesen Standard als anerkannten Konsensstandard für Medizinprodukte. Die Anwendbarkeit sollte jedoch stets anhand der jeweiligen Produktspezifikation, Monographie, regulatorischen Anforderungen und des Verwendungszwecks geprüft werden.
Der USP-61-Standard ist notwendig, da mikrobielle Kontamination nicht immer zuverlässig durch Sichtprüfung oder allgemeine Laborbeobachtung beurteilt werden kann. Dieser Standard sieht Folgendes vor:
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass der USP-61-Standard ein entscheidender Standard der pharmazeutischen Mikrobiologie zur Bestimmung der Anzahl lebensfähiger Mikroorganismen in nicht sterilen Produkten ist. Sein Hauptaugenmerk liegt auf der quantitativen Bestimmung aerober Mikroorganismen. Der Standard legt zudem Wert auf die Eignung der Methode, wachstumsfördernde Assays, geeignete Kontrollen, Probenvorbereitung und zuverlässige Zählverfahren.
Für Hersteller ist die korrekte Anwendung des USP 61-Standards von entscheidender Bedeutung, da die Zuverlässigkeit des Ergebnisses der mikrobiellen Zählung nicht nur von der Kolonienzahl selbst abhängt, sondern auch vom Nachweis, dass die gesamte Analysemethode in der Lage ist, Mikroorganismen aus dem untersuchten Produkt zu gewinnen.
Seit vielen Jahren versteht unser Unternehmen mit seinem kompetenten und erfahrenen Team die Bedürfnisse seiner Kunden, bietet ihnen die benötigten fortschrittlichen Prüfdienstleistungen und unterstützt sie beim Aufbau, der Implementierung und der Optimierung von Managementsystemen. In diesem Rahmen bieten wir auch Prüfdienstleistungen gemäß dem USP-61-Standard an.
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