AOAC 991.43 Fibres alimentaires totales, solubles et insolubles dans les aliments - Méthode enzymatique-gravimétrique MES-TRIS Bufler A

Conformément à la norme « AOAC 991.43 Fibres alimentaires totales, solubles et insolubles dans les aliments - Méthode enzymatique-gravimétrique MES-TRIS Bufler A » élaborée par l’Association officielle des chimistes analytiques (AOAC), deux échantillons d’aliments secs (dégraissés s’ils contiennent plus de 10 % de matières grasses) sont soumis à une digestion enzymatique séquentielle à l’aide d’α-amylase thermorésistante, de protéase et d’amyloglucosidase afin d’éliminer l’amidon et les protéines. Pour le dosage des fibres alimentaires totales, le produit de la digestion enzymatique est traité à l’alcool pour précipiter les fibres solubles avant filtration. Le résidu de fibres totales est ensuite lavé à l’alcool et à l’acétone, séché et pesé. Pour le dosage des fibres alimentaires solubles et insolubles, le produit de la digestion enzymatique est filtré, et les fibres insolubles résiduelles sont lavées à l’eau chaude, séchées et pesées. Pour le dosage des fibres solubles, le filtrat et le résidu combinés sont précipités à l’alcool, filtrés, séchés et pesés. Les valeurs résiduelles des fibres alimentaires totales, insolubles et solubles sont corrigées en fonction des protéines, des cendres et de l'espace vide.

L'équipement suivant est utilisé dans les tests :

• Béchers : 400 ou 600 mL (sous n'importe quelle forme).
• Creuset de filtration : disque fritté à gros grains, porosité ASTM 40-60 µm, Pyrex de 60 mL. Préparation : incinération pendant une nuit dans un four à cendres à 525 °C. Avant de retirer les creusets, la température du four doit descendre en dessous de 130 °C. Les creusets sont ensuite trempés pendant 1 heure à température ambiante dans une solution de nettoyage à 2 %.

Les creusets sont rincés à l'eau courante puis à l'eau déminéralisée. Un dernier rinçage à l'acétone (15 mL) est effectué, suivi d'un séchage à l'air. Environ 1,0 g de Célite est ajouté aux creusets secs, puis le mélange est séché à 130 °C jusqu'à obtention d'une masse constante. Le creuset est ensuite refroidi dans un dessiccant pendant environ une heure, et sa masse, incluant la Célite, est mesurée à 0,1 mg près.

• Système de vide : pompe à vide ou aspirateur avec régulateur. Bouteille filtrante de 1 L à parois épaisses avec tubulures latérales. Adaptateurs à joint torique en caoutchouc pour filtration. Masques.
• Bains-marie agitateurs : doté d’une minuterie marche/arrêt automatique, il maintient une température de 98 °C ± 2 °C. Une température constante de 60 °C peut également être réglée.
• Balance : Analytique, précision plus/moins 0,1 mg.
• Four à moufle : Peut maintenir une température de 525 degrés plus/moins 5 degrés.
• Four : Peut maintenir des températures entre 105 et 130 degrés Celsius, plus ou moins 3 degrés.
• Déshydratant : dioxyde de silicium ou un déshydratant équivalent. Toutes les deux semaines, le déshydratant est séché pendant une nuit à 130 degrés.
• pH-mètre : Compensation de température, valeurs de pH standardisées avec des solutions tampon de 4, 0, 7, 0 et 10, 0.
• Pipettes : Avec embouts jetables. Capacité de 100 à 300 µL et de 5 mL.
• Distributeurs.
• Agitateurs magnétiques et tiges d'agitation.

La norme AOAC 991.43 est l'une des méthodes formelles les plus reconnues et les plus importantes historiquement pour la détermination des fibres alimentaires dans les aliments. Depuis sa première publication en 1991, cette méthode constitue un pilier de l'analyse des fibres alimentaires. Avant cette norme, les fibres alimentaires étaient généralement mesurées uniquement sous forme de fibres brutes. La méthode décrite dans la norme AOAC 920.86 sous-estimait fortement la teneur réelle en fibres alimentaires, ne mesurant qu'une faible fraction de cellulose et de lignine et perdant la majeure partie de l'hémicellulose, de la pectine, des gommes et de l'amidon résistant.

La norme AOAC 991.43 a été développée pour fournir une mesure plus précise sur le plan physiologique qui reflète mieux ce qui résiste réellement à la digestion dans l'intestin grêle humain (la définition physiologique des fibres alimentaires), et est devenue la base des valeurs de fibres alimentaires sur des millions d'étiquettes nutritionnelles dans le monde entier.

Cette méthode utilise une combinaison de digestion enzymatique et de détermination gravimétrique :

• Préparation des échantillons : Les échantillons de test doubles sont gélatinisés avec de l'α-amylase thermorésistante.
• Digestion enzymatique : Les enzymes protéase (pour éliminer les protéines) et amyloglucose (pour hydrolyser l'amidon digestible en glucose) simulent les conditions digestives humaines (pH, température et durée similaires à celles de la bouche, de l'estomac et de l'intestin grêle).
• Précipitation des fibres alimentaires : De l'éthanol (4 volumes) est ajouté pour précipiter les polymères de fibres alimentaires solubles et éliminer les substances digérées.
• Filtration et lavage : Le résidu (contenant la totalité des fibres alimentaires) est filtré, lavé à l'éthanol et à l'acétone, séché et pesé.
• Correction des protéines et des cendres : une paire d'échantillons est analysée pour les protéines résiduelles, l'autre pour les cendres ; ces valeurs sont soustraites pour obtenir la teneur totale en fibres alimentaires corrigée.
• Séparation optionnelle des fibres solubles et insolubles : avant la précipitation à l’éthanol, le produit de la digestion peut être filtré. Le résidu obtenu après filtration correspond aux fibres alimentaires insolubles. Le filtrat est ensuite précipité à l’éthanol pour récupérer les fibres alimentaires solubles. Fibres alimentaires totales = Fibres alimentaires insolubles + Fibres alimentaires solubles.

Les caractéristiques fondamentales de cette méthode sont les suivantes :

• Il mesure à la fois les fibres alimentaires solubles et insolubles.
• Il contient de l'amidon résistant, c'est-à-dire qui résiste à la digestion enzymatique.
• Le DP contient la plupart des oligosaccharides indigestes, les 10 premiers étant les moins abondants (car ils précipitent dans l'éthanol à 78 %).
• DP exclut les oligosaccharides indigestes 3-9, qui nécessitent des méthodes séparées.

Les avantages de cette méthode sont les suivants :

• Équipement relativement simple (pas besoin de HPLC).
• Des résultats robustes et reproductibles d'un laboratoire à l'autre.
• Données de validation complètes et études interlaboratoires.
• Il mesure les fibres physiologiquement pertinentes.

Utilisation pratique actuelle :

• Elle est encore utilisée comme méthode de référence dans de nombreux pays qui n'ont pas adopté la nouvelle définition du Codex/FDA.
• Elle est fréquemment utilisée dans la recherche pour comparer des données historiques.
• De nombreux laboratoires privilégient les nouvelles méthodes, pour lesquelles les différences sont minimes, pour les produits céréaliers, les légumes et les aliments traditionnels riches en fibres.

Depuis de nombreuses années, notre organisation, forte de son personnel compétent et expérimenté, comprend les besoins de ses clients, leur fournit les services d'analyse avancés requis et les accompagne dans la mise en place, l'application et l'amélioration de leurs systèmes de gestion. Dans ce cadre, nous proposons également des services d'analyse aux entreprises, conformément à la norme « AOAC 991.43 Fibres alimentaires totales, solubles et insolubles dans les aliments – Méthode enzymatique-gravimétrique MES-TRIS Bufler A ».