A norma “Método de teste de barreira de membrana in vitro OCDE TG 435 para irritação da pele”, publicada sob as diretrizes da OCDE sobre conduta empresarial responsável para empresas multinacionais (diretrizes da OCDE), descreve um método de teste de barreira de membrana in vitro usado para identificar produtos químicos corrosivos. Este método de teste utiliza uma membrana artificial projetada para reagir a produtos químicos corrosivos de maneira semelhante à pele de um animal.
O método de teste de barreira de membrana in vitro pode ser usado para testar sólidos, líquidos e emulsões. No entanto, substâncias aquosas com valores de pH na faixa de 4,5 a 8,5 geralmente não são adequadas para testes.
O método de ensaio descrito permite a identificação de produtos químicos e misturas corrosivas e a subcategorização de substâncias corrosivas conforme permitido no sistema globalmente harmonizado de classificação e rotulagem de produtos químicos. Esta classificação é baseada no tempo de penetração da substância através da barreira da membrana.
Este sistema de teste consiste em dois componentes:
Ao aplicar este sistema de teste, é preparado um número adequado de réplicas para cada substância de teste e seus controles correspondentes. Os tempos de aplicação da substância em estudo à barreira membranar são registados e escalonados. O tempo (em minutos) entre a aplicação da substância em estudo à barreira da membrana e a penetração da barreira é utilizado para determinar a corrosividade da substância em estudo.
A corrosividade da pele tem sido tradicionalmente determinada aplicando o produto químico em estudo à pele de animais vivos e avaliando o grau de dano tecidual após um período de tempo especificado. Além da norma OCDE TG 435, vários outros métodos de ensaio in vitro foram adotados como alternativas ao procedimento padrão de pele de coelho in vivo (OCDE TG 404) utilizado para identificar produtos químicos corrosivos. As diretrizes da OCDE recomendam a utilização de métodos de ensaio in vitro validados e aceites.
Nesta abordagem modular, resultados positivos de métodos de testes in vitro são usados para classificar um produto químico como corrosivo sem a necessidade de testes em animais. Desta forma, pretende-se prevenir a utilização de animais em testes e prevenir a dor e a angústia que podem surgir se animais forem utilizados para este fim.
Este método de teste detecta danos à barreira da membrana causados por produtos químicos corrosivos após a aplicação do produto químico na superfície da barreira da membrana macromolecular sintética por meio de um “sistema de detecção química”, possivelmente pelos mesmos mecanismos de irritação que operam na pele viva.
A penetração ou quebra da barreira da membrana pode ser medida por vários procedimentos ou sistemas de detecção química, incluindo a mudança na cor do corante indicador de pH ou outra propriedade da solução indicadora abaixo da barreira.
Deve ser determinado que a barreira de membrana é válida para o uso pretendido, ou seja, relevante e confiável. Isto inclui garantir que as diferentes preparações sejam consistentes em termos das suas propriedades de barreira, tais como a capacidade de manter uma barreira contra produtos químicos não corrosivos, a capacidade de categorizar as propriedades corrosivas dos produtos químicos entre as subcategorias de corrosividade do sistema globalmente harmonizado de classificação e rotulagem de produtos químicos. A classificação atribuída é baseada no tempo que um produto químico leva para atravessar a barreira da membrana e penetrar na solução indicadora.
Antes da utilização rotineira do método de teste de barreira de membrana in vitro, os laboratórios devem cumprir esta norma e demonstrar a sua competência técnica classificando corretamente as substâncias de qualificação propostas. Quando uma substância listada não estiver disponível ou for justificada, pode ser utilizada outra substância para a qual estejam disponíveis dados de referência in vivo e in vitro suficientes.
Os testes devem ser realizados em temperatura ambiente (faixa de 17 a 25 graus) e os componentes devem atender às condições especificadas na norma.
Antes de realizar o teste de barreira de membrana, é realizado um teste de compatibilidade química para determinar se o produto químico em estudo é detectável pelo sistema de detecção química. Se o sistema de detecção química não detectar o produto químico em estudo, o método de ensaio de barreira de membrana não é adequado para avaliar a potencial corrosividade desse produto químico em estudo, devendo ser utilizado um método de ensaio diferente. O sistema de detecção química e as condições de exposição utilizadas para testes de compatibilidade devem refletir a exposição em testes subsequentes de barreira de membrana.
Se for adequado para o método de ensaio, o produto químico em estudo qualificado por ensaios de compatibilidade deve ser submetido a um ensaio de categoria de escala temporal, que é um ensaio de triagem para distinguir entre ácidos ou bases fracos e fortes. Por exemplo, no método de teste de referência validado, um teste de categorização de escala de tempo é usado para indicar quais duas escalas de tempo devem ser usadas dependendo se são detectadas reservas ácidas ou alcalinas significativas. Dependendo da reserva ácida ou alcalina do produto químico em estudo, devem ser utilizadas duas escalas de tempo de ruptura diferentes para determinar a corrosividade e o sistema harmonizado a nível mundial para classificação e rotulagem da subcategoria de corrosividade cutânea dos produtos químicos.
A barreira de membrana consiste em dois componentes: um gel aquoso macromolecular proteico e uma membrana de suporte permeável. O gel proteico deve ser impermeável a líquidos e sólidos, mas pode sofrer erosão e tornar-se permeável. A barreira de membrana totalmente construída deve ser armazenada sob condições predeterminadas que demonstraram evitar a degradação do gel, tais como dessecação, crescimento microbiano, cisalhamento ou fissuração, o que degradaria o seu desempenho. O período de armazenamento aceitável deve ser determinado e as preparações de barreira de membrana não devem ser utilizadas após este período. A membrana de suporte permeável fornece suporte mecânico ao gel proteico durante o processo de gelificação e exposição ao produto químico em estudo. A membrana de suporte deve evitar que o gel se desloque ou se desloque e deve ser facilmente permeável a todos os produtos químicos em estudo.
Em termos do sistema de detecção química, a solução indicadora, que é a mesma solução utilizada para os testes de compatibilidade, deve responder à presença do produto químico em estudo. Deve ser utilizado um corante indicador de pH ou uma combinação de corantes, como o vermelho de cresol e o laranja de metilo, que apresentará uma mudança de cor em resposta à presença do produto químico em estudo.
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