O padrão “OECD TG 442E Sensibilização cutânea in vitro – Teste de ativação de linhagem celular humana (h-CLAT)”, publicado sob as diretrizes da OCDE sobre conduta empresarial responsável para empresas multinacionais (diretrizes da OCDE), é proposto para abordar a ativação de células dendríticas, um evento-chave no caminho de resultados adversos para sensibilização cutânea.
Esta diretriz de teste aborda o ponto final de risco à saúde humana, a sensibilização cutânea após a exposição a um produto químico em teste. Sensibilização cutânea refere-se a uma resposta alérgica após o contato da pele com o produto químico em teste, conforme definido pelo Sistema Globalmente Harmonizado de Classificação e Rotulagem de Produtos Químicos das Nações Unidas.
Esta norma fornece quatro métodos de teste in vitro que abordam o mesmo evento-chave no caminho do resultado negativo:
Todos esses métodos são utilizados para auxiliar na distinção entre sensibilizantes e não sensibilizantes da pele, de acordo com o Sistema Globalmente Harmonizado de Classificação e Rotulagem de Produtos Químicos das Nações Unidas. Os métodos de teste descritos neste guia quantificam alterações na expressão de um conjunto de genes associados ao processo de ativação de monócitos e células dendríticas (assinatura de biomarcadores genômicos) após exposição a marcadores de superfície celular ou sensibilizantes.
A norma TG 442E da OCDE é um teste in vitro robusto para identificar potenciais sensibilizadores químicos da pele, com ampla aplicabilidade e precisão preditiva superior a 90%. Este teste fornece uma predição binária que classifica as amostras de teste como sensibilizantes ou não sensibilizantes da pele. O objetivo desta diretriz é determinar se uma substância química pode causar sensibilização da pele, ou seja, dermatite alérgica de contato, ativando respostas imunológicas específicas sem a realização de testes em animais.
O teste de ativação de linhagem celular humana (h-CLAT) é um teste in vitro (não em animais) usado para avaliar se uma substância química pode causar sensibilização cutânea. A sensibilização cutânea é uma reação alérgica causada por uma reação exagerada do sistema imunológico a uma substância após o contato com a pele. O h-CLAT foi desenvolvido para modelar uma etapa biológica fundamental no desenvolvimento da sensibilização cutânea: a ativação de células dendríticas (um tipo de célula imune) por uma substância química sensibilizadora.
Este método de teste é importante porque substitui testes mais antigos em animais. Além disso, a norma TG 442E da OCDE é valorizada por fornecer métodos padronizados, cientificamente validados e internacionalmente aceitos para avaliar se produtos químicos causam sensibilização cutânea, um tipo de reação alérgica causada pela exposição repetida da pele.
O método h-CLAT quantifica alterações na expressão de marcadores de superfície celular associados ao processo de ativação de monócitos e células dendríticas na linhagem celular de leucemia de monócitos humanos THP-1 após exposição a sensibilizadores. Os níveis de expressão medidos de marcadores de superfície celular de células dendríticas são então utilizados para auxiliar na distinção entre sensibilizadores e dessensibilizadores cutâneos.
Este método é um ensaio in vitro que mede as alterações na expressão de marcadores de superfície celular em células THP-1 da linhagem celular de leucemia de monócitos humanos após 24 horas de exposição a um produto químico de teste. Essas moléculas de superfície são marcadores típicos da ativação de THP-1 em monócitos e podem mimetizar a ativação de células dendríticas, que desempenham um papel crítico na ativação de células T. As alterações na expressão de marcadores de superfície são medidas por citometria de fluxo após a coloração celular com anticorpos marcados com fluorocromo. A medição da citotoxicidade é realizada simultaneamente para avaliar se a regulação positiva da expressão de marcadores de superfície ocorre em concentrações subcitotóxicas. A intensidade relativa da fluorescência dos marcadores de superfície em comparação com o controle solvente/veículo é calculada e usada no modelo de predição para apoiar a distinção entre sensibilizadores e não sensibilizadores.
Em resumo, a OCDE TG 442 é essencial para dar suporte a testes de segurança éticos, confiáveis e globalmente consistentes de produtos químicos e de consumo, especialmente à luz das regulamentações em evolução e da demanda pública por ciência livre de crueldade.
Nossa organização, que há anos apoia empresas de todos os setores por meio de uma ampla gama de atividades de teste, medição, análise e avaliação, conta com uma equipe sólida de colaboradores que acompanham de perto os desenvolvimentos globais em ciência e tecnologia e estão em constante aprimoramento. Nesse contexto, também prestamos serviços de teste para empresas em conformidade com a norma OCDE TG 442E de Sensibilidade Cutânea In Vitro - Teste de Ativação de Linhagem Celular Humana (h-CLAT).
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