สำหรับการทดสอบความเข้ากันได้ทางชีวภาพที่ต้องมีการทดสอบความเป็นพิษต่อพันธุกรรมเรามีการทดสอบหลายประเภท ได้แก่ Ames Mutagenicity, Chromosomal Aberration, Mouse Lymphoma และ Mouse Micronucleus ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับประเภทผลิตภัณฑ์และข้อกำหนดข้อมูลของคุณ การทดสอบเหล่านี้สอดคล้องกับหลักเกณฑ์ของ OECD และ ISO โดยเป็นหนึ่งในสามระดับการทดสอบในหลอดทดลองสำหรับความเป็นพิษต่อพันธุกรรม
การทดสอบการกลายพันธุ์ของ Ames ใช้เพื่อตรวจสอบกิจกรรมการกลายพันธุ์ที่อาจเกิดขึ้นได้ของสารสกัดจากอุปกรณ์ / วัสดุทางการแพทย์ การทดสอบการกลายพันธุ์ย้อนกลับของแบคทีเรีย (การทดสอบ Ames) ดำเนินการโดยเป็นส่วนหนึ่งของการทดสอบความเป็นพิษต่อพันธุกรรมของแบตเตอรี่เพื่อตรวจสอบว่าการรั่วไหลจากอุปกรณ์ / วัสดุทางการแพทย์นั้นเป็นการกลายพันธุ์หรือไม่
การทดสอบความผิดปกติของโครโมโซมใช้ในการสแกนอุปกรณ์ / เวชภัณฑ์ทางการแพทย์เพื่อตรวจสอบว่าสิ่งเหล่านี้ก่อให้เกิดความผิดปกติของโครโมโซมโครงสร้างในเซลล์รังไข่ของหนูแฮมสเตอร์จีน (CHO) หรือไม่ การทดสอบจะดำเนินการกับอุปกรณ์ / วัสดุที่มีการสัมผัสกับผู้ป่วยอย่างถาวรการสัมผัสกับผู้ป่วยเป็นเวลานานหรือการสัมผัสเลือด การทดสอบความผิดปกติของโครโมโซมเป็นไปตามหลักเกณฑ์ของ OECD และ ISO โดยเป็นหนึ่งในสามระดับของการทดสอบความเป็นพิษต่อพันธุกรรมในหลอดทดลอง
การทดสอบมะเร็งต่อมน้ำเหลืองของหนูมักใช้การเพาะเลี้ยงเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมเพื่อระบุการกลายพันธุ์ของยีนการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างและจำนวนโครโมโซมและความเป็นพิษของยีนอื่น ๆ ที่เกิดจากอุปกรณ์ทางการแพทย์วัสดุหรือสารสกัด การทดสอบเหล่านี้ใช้เพื่อให้แน่ใจว่าอุปกรณ์ที่มีการสัมผัสกับร่างกายในระยะยาวจะไม่เปิดเผยความเป็นพิษต่อพันธุกรรมที่อาจนำไปสู่การกลายพันธุ์ของยีนที่อาจเกิดมะเร็งได้
การทดสอบไมโครนิวเคลียสของหนูใช้ในการประเมินศักยภาพของอุปกรณ์ทางการแพทย์ในการกระตุ้นให้เกิดการสร้างไมโครนิวเคลียสในเม็ดเลือดแดงที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะซึ่งพบในไขกระดูกของหนูที่โตเต็มวัย
การกลายพันธุ์ของเอมส์
การทดสอบการกลายพันธุ์ของ Ames ใช้เชื้อ Salmonella typhimurium หลายสายพันธุ์ที่คัดเลือกมาเพื่อความไวต่อการกลายพันธุ์เนื่องจาก:
สายพันธุ์ทดสอบยังต้องการฮิสทิดีนในการเจริญเติบโตเนื่องจากการกลายพันธุ์ของยีนที่ควบคุมการผลิตฮิสทิดีน
การทดสอบเอมส์ทำได้โดยการผสมสารสกัดของสารทดสอบกับสิ่งมีชีวิตทดสอบในสารละลายวุ้นอ่อนที่มีฮิสทิดีนเพียงเล็กน้อย ฮิสทิดีนช่วยให้สิ่งมีชีวิตทดสอบที่ฉีดวัคซีนเข้าไปในช่องจำนวน จำกัด แต่ไม่เพียงพอที่จะทำให้เติบโตได้ตามปกติ
อย่างไรก็ตามหากความเครียดผ่านการกลายพันธุ์แบบย้อนกลับ (เกิดขึ้นเองหรือเกิดจากสารทดสอบหรือวัสดุควบคุมที่เป็นบวก) สิ่งมีชีวิตนั้นจะไม่ต้องใช้ฮิสทิดีนในการเจริญเติบโตอีกต่อไปและสามารถสร้างอาณานิคมที่มองเห็นได้หรือตัวพลิกกลับได้ การกลายพันธุ์ของสิ่งมีชีวิตทดสอบเฉพาะในบริเวณยีนฮิสทิดีนทำให้สิ่งมีชีวิตทดสอบย้อนกลับการกลายพันธุ์เป็นสิ่งมีชีวิตซึ่งไม่ต้องใช้ฮิสทิดีนอีกต่อไป
สายพันธุ์ทดสอบถูกเลือกเพื่อตรวจหาการกลายพันธุ์ประเภทต่างๆ สายพันธุ์ทดสอบที่ใช้ ได้แก่ TA97A, TA98, TA100, TA102 และ TA1535
นอกจากนี้ยังมีการทดสอบเฉพาะจุดซึ่งสารสกัดของผลิตภัณฑ์ทดสอบเปื้อนบนจานที่มีสิ่งมีชีวิตทดสอบที่มีฮิสทิดีนจำนวนเล็กน้อย เมื่อสารทดสอบแพร่ผ่านวุ้นก็จะเจือจางมากขึ้น สิ่งนี้ช่วยให้สามารถตรวจจับ mutagens ที่ทำให้เกิดการยับยั้งสายพันธุ์ทดสอบบางชนิดได้ การทดสอบทำได้ด้วยการเปิดใช้งาน S-9 หรือไม่มีการเปิดใช้งาน S-9 ระบบกระตุ้น S-9 ได้รับการออกแบบมาเพื่อจำลองระบบเอนไซม์ตับของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและใช้เพื่อตรวจจับสารที่อยู่ระหว่างการกระตุ้นการเผาผลาญจากรูปแบบที่ไม่ก่อกลายพันธุ์
การทดสอบความคลาดเคลื่อนของโครโมโซมทำได้โดยการเปิดเผยเซลล์ CHO ไปยังสารสกัดจากสารทดสอบ สื่อที่มีเลือดออกรวมอยู่ในการทดสอบเป็นการควบคุมเชิงลบ
เซลล์ CHO ถูกเพาะในขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ 75 cm2 และบ่มด้วยอาหารเลี้ยงเซลล์ + เซรั่ม 10% จนมาบรรจบกัน 40-60%
เซลล์ CHO สัมผัสกับสารสกัดจากผลิตภัณฑ์ทดสอบในที่ที่มีและไม่มีระบบกระตุ้นการเผาผลาญ ระบบกระตุ้นการเผาผลาญเป็นส่วนผสมของ S9 homogenate, isocitrate และ NADP การควบคุมเชิงบวกที่ใช้คือ Cyclophosphamide ที่มีการกระตุ้นการเผาผลาญและ Mitomycin C โดยไม่มีการกระตุ้นการเผาผลาญ
ก่อนการเก็บเกี่ยวเซลล์เซลล์จะได้รับการตรวจสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ ขวดจะได้คะแนนตามระดับความเป็นพิษต่อเซลล์ทางสัณฐานวิทยาที่แยกแยะได้ในระดับสัมพัทธ์ 10993 - 5 ต่อ AAMI / ANSI / ISO 87-0 และ USP <4> ค่าเฉลี่ยของผลลัพธ์จากขวดทั้งสามจะถูกเฉลี่ยเพื่อให้ได้คะแนนความเป็นพิษต่อเซลล์ขั้นสุดท้าย
เมื่อสิ้นสุดระยะการสัมผัสและการแสดงออกเซลล์จะถูกจับที่เมตาเฟสด้วยโคลทาไซด์ จากนั้นเซลล์จะถูกลบออกจากขวดและรับการรักษาด้วยสารละลาย hypotonic และ fixative เซลล์ถูกฝากไว้บนสไลด์ด้วยกล้องจุลทรรศน์ โครโมโซมถูกย้อมด้วย Giemsa stain และปกคลุมด้วย Permount จากนั้นเซลล์จะถูกตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์เพื่อหาความผิดปกติของโครโมโซม
ความเข้ากันได้ทางชีวภาพในการทดสอบความเป็นพิษต่อพันธุกรรมเซลล์มะเร็งต่อมน้ำเหลืองของหนูถูกใช้เพื่อตรวจสอบว่าวัสดุทดสอบสามารถก่อให้เกิดการกลายพันธุ์ของจุดหรือ clastogenic (การแตกของโครโมโซม) ในสายเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่เพาะเลี้ยงได้หรือไม่ ในกรณีนี้ยีนเป้าหมายไทมิดีนไคเนส (TK) เป็นยีนที่จ่ายได้ การสูญเสียกิจกรรม TK บ่งชี้ว่ามีการกลายพันธุ์เกิดขึ้น เนื่องจาก TK มีส่วนร่วมในเส้นทางช่วยเหลือสำหรับไทมิดีนที่ได้จากการเผาผลาญของดีเอ็นเอเซลล์จึงสามารถสังเคราะห์ไทมิดีนเดโนโว ดังนั้นการสูญเสีย TK จึงไม่ทำให้เซลล์ไม่มีชีวิต
สามารถเลือกสารกลายพันธุ์ได้และความถี่ของการกลายพันธุ์สามารถหาได้โดยการรวม thymidine analog (trifluorothymidine หรือ TFT) ลงในอาหารเลี้ยงเชื้อของเซลล์หลังจากสัมผัสกับวัสดุทดสอบ เซลล์ปกติที่มี TK เหมือนเดิม ได้แก่ แอนะล็อกและเทมเพลต เซลล์กลายพันธุ์ (ขาดกิจกรรม TK) อยู่รอดสร้างอาณานิคมและหาปริมาณ
ในการทดสอบไมโครนิวเคลียสของเมาส์อุปกรณ์ทางการแพทย์จะถูกถอดออกในสภาพแวดล้อมที่มีขั้วและไม่มีขั้ว สารสกัดจากผลิตภัณฑ์ทดสอบการควบคุมเชิงบวกและการควบคุมเชิงลบให้ยาที่ 20 มล. / กก. ในหนูทั้งตัวผู้และตัวเมีย จากนั้นไขกระดูกจะถูกเก็บเกี่ยวภายใน 24 และ 48 ชั่วโมงหลังการให้ยาและตรวจดูว่ามีเม็ดเลือดแดงชนิดไมโครนิวเคลียสหลายสี (PCEs) หรือไม่ การมีอยู่ของ PCE เป็นการบ่งชี้ว่ามีสารก่อกลายพันธุ์รั่วไหลออกมาจากอุปกรณ์
EUROLABด้วยทีมงานที่เชี่ยวชาญและห้องปฏิบัติการที่ได้รับการรับรองระดับสากล การทดสอบความเป็นพิษต่อพันธุกรรม มันทำการทดสอบการวิเคราะห์การวัดการประเมินผลและบริการสร้างรายงานทั้งหมดอย่างสมบูรณ์และเชื่อถือได้
คุณสามารถขอให้เรากรอกแบบฟอร์มของเราเพื่อรับการนัดหมายเพื่อรับข้อมูลรายละเอียดเพิ่มเติมหรือเพื่อขอการประเมินผล
