ASTM E2197-17 Standardowa metoda ilościowego badania nośnika krążkowego do określania działania bakteriobójczego, wirusobójczego, grzybobójczego, prątkobójczego i grzybobójczego środków chemicznych

W normie „ASTM E2197-17 Standardowa metoda ilościowego badania nośnika krążkowego do określania aktywności substancji chemicznych o działaniu bakteriobójczym, wirusobójczym, grzybobójczym, prątkobójczym i spoicobójczym” opracowanej przez Amerykańskie Towarzystwo Badań i Materiałów (ASTM) szczotkowana stal nierdzewna reprezentuje twardą, nie -porowate powierzchnie środowiskowe i wyroby medyczne Ocena zdolności do inaktywacji bakterii wegetatywnych, wirusów, grzybów, prątków i zarodników bakterii na nośnikach krążkowych. Opisano zastosowaną metodę badawczą.

Ten standard ma również na celu umożliwienie porównania ocalałych ze średnią co najmniej trzech przewoźników kontrolnych w celu ustalenia, czy standard wydajności został spełniony. Aby zapewnić właściwą ocenę statystyczną wyników, liczba żywych organizmów w inokulum testowym musi być wystarczająco duża, aby uwzględnić zarówno standard wykonania, jak i różnice eksperymentalne w wynikach. Ponadto ta metoda testowania nie obejmuje wycierania ani pocierania. Dlatego nie jest przeznaczony do testowania usunięć.

Na potrzeby niniejszej normy, oprócz terminów i definicji zawartych w „Standardowej terminologii dotyczącej środków przeciwdrobnoustrojowych i przeciwwirusowych” ASTM E2756-19, mają zastosowanie następujące definicje:

• Nośnik oznacza nieożywioną powierzchnię lub przedmiot zaszczepiony organizmem testowym.
• Eluat oznacza eluent zawierający odzyskany organizm lub organizmy.
• Eluent to dowolny roztwór, który jest nieszkodliwy dla organizmu lub organizmów testowych i jest dodawany do nośnika w celu odzyskania organizmu lub organizmów.
• Neutralizacja odnosi się do procesu wygaszania aktywności przeciwdrobnoustrojowej badanej substancji. Można to osiągnąć poprzez rozcieńczenie lub dodanie jednego lub większej liczby chemicznych neutralizatorów do mieszaniny organizmów lub substancji testowych.
• Obciążenie gleby to roztwór jednej lub większej liczby substancji organicznych lub nieorganicznych, bądź obu, dodanych do zawiesiny organizmu testowego w celu symulacji obecności wydzielin, wydalin lub innych substancji obcych.
• Organizm testowy to organizm posiadający cechy umożliwiające jego łatwą identyfikację. Można go również nazwać organizmem zastępczym, symulantem lub organizmem markerowym.
• Substancją badaną jest preparat zawierający składniki przeciwdrobnoustrojowe.

Na każdym krążku (o średnicy 1 cm) mieści się 10 µl organizmu testowego z dodatkiem gleby. Inokulum suszy się, a następnie krążek umieszcza się na wewnętrznej dolnej powierzchni sterylnej plastikowej fiolki przed kontaktem z 50 µl rozcieńczenia użytkowego badanej substancji. Czas kontaktu i temperaturę można zmieniać w zależności od potrzeb. Nośniki kontrolne otrzymują 50 µl płynu, który jest nieszkodliwy dla organizmów testowych i komórek gospodarza, jeśli są obecne, ale poza tym należy się z nim obchodzić w taki sam sposób, jak z nośnikami testowymi.

W przypadku testów na bakterie wegetatywne, grzyby, prątki i spory bakteryjne, substancję testową następnie neutralizuje się i eluuje inokulum. Eluat i kolejne popłuczyny nośnika i fiolki przepuszcza się przez filtr membranowy. Płytki do hodowli filtracyjnej inkubuje się, liczy kolonie i oblicza redukcję log10.

W przypadku testów wirusowych odpowiednie rozcieńczenia eluatu są wstrzykiwane do odpowiednich hodowli komórkowych, hodowle są badane pod kątem cytopatologii/ognisk zakaźnych, które są szacowane jako najbardziej prawdopodobna liczba lub liczone jako ogniska lub płytki, a następnie obliczany jest log10.

Konstrukcja tego testu eliminuje jakąkolwiek utratę żywych organizmów w wyniku przemywania, a tym samym umożliwia uzyskanie statystycznie ważnych danych przy użyciu znacznie mniejszej liczby nośników testowych, niż byłoby to wymagane w przypadku metod opartych na prostych szacunkach liczby najbardziej prawdopodobnej.

Rygor w testowaniu osiąga się dzięki zastosowaniu obciążenia brudem, mikrotopografii powierzchni nośnej ze szczotkowanej stali nierdzewnej oraz mniejszemu stosunkowi badanej substancji do pola powierzchni, co jest typowe dla wielu zastosowań środków dezynfekcyjnych. Zatem oceniana substancja testowa stoi przed rozsądnym wyzwaniem, polegającym na umożliwieniu skutecznego odzyskiwania organizmów testowych z zaszczepionych nośników. Krążki metalowe w teście podstawowym są także kompatybilne z szeroką gamą substancji aktywnych.

Konstrukcja nośników umożliwia umieszczenie w każdym dokładnie odmierzonej objętości organizmu testowego (10 µl) oraz płynu kontrolnego lub substancji testowej (50 µl).

Inokulum umieszcza się na środku każdego krążka, przy czym objętość badanej substancji pokrywa prawie całą powierzchnię krążka, praktycznie eliminując w ten sposób ryzyko narażenia jakichkolwiek organizmów.

We wszystkich testach, z wyjątkiem testów przeciwko wirusom, dodanie 10 ml eluentu/rozcieńczalnika zapewnia rozcieńczenie substancji testowej 1:200 bezpośrednio po zakończeniu okresu kontaktu. Chociaż ten etap sam w sobie jest wystarczający do zatrzymania działania bakteriobójczego większości substancji czynnych, protokół testu pozwala na dodanie, jeśli to konieczne, do eluentu/rozcieńczalnika specyficznego neutralizatora. Z wyjątkiem wirusów, etap filtracji membranowej umożliwia również przetworzenie całego eluatu z nośników testowych, a tym samym wychwycenie, a następnie wykrycie nawet niewielkiej liczby żywych organizmów, które mogą być obecne. Późniejsze płukanie filtrów membranowych solą fizjologiczną zmniejsza również ryzyko przedostania się pozostałości inhibitora do mediów regeneracyjnych.

Wśród licznych badań, pomiarów, analiz i ocen przeprowadzonych dla przedsiębiorstw z różnych sektorów, nasza firma, dzięki przeszkolonemu i fachowemu personelowi oraz zaawansowanemu sprzętowi technologicznemu, opracowała „Standardowy krążek ilościowy ASTM E2197-17 do oznaczania działania bakteriobójczego, wirusobójczego, działanie grzybobójcze, prątkobójcze i sporobójcze środków chemicznych”. Świadczy także usługi badawcze określone w normie „Metoda badania nośnika”.