Norma „OECD TG 442E Badanie in vitro uczuleń skóry – test aktywacji linii komórek ludzkich (h-CLAT)”, opublikowana zgodnie z wytycznymi OECD dotyczącymi odpowiedzialnego prowadzenia działalności w przedsiębiorstwach międzynarodowych (wytyczne OECD), ma na celu zajęcie się kwestią aktywacji komórek dendrytycznych, kluczowego zdarzenia w niekorzystnym procesie uczuleń skóry.
Niniejsze wytyczne testowe dotyczą punktu końcowego zagrożenia dla zdrowia człowieka, jakim jest uczulenie skóry po narażeniu na badaną substancję chemiczną. Uczulenie skóry oznacza reakcję alergiczną po kontakcie skóry z badaną substancją chemiczną, zgodnie z definicją Globalnie Zharmonizowanego Systemu Klasyfikacji i Oznakowania Chemikaliów Organizacji Narodów Zjednoczonych.
Norma ta określa cztery metody badań in vitro, które odnoszą się do tego samego kluczowego zdarzenia w ścieżce wyniku ujemnego:
Wszystkie te metody służą do rozróżniania substancji uczulających skórę od substancji nieuczulających, zgodnie z Globalnie Zharmonizowanym Systemem Klasyfikacji i Oznakowania Chemikaliów Organizacji Narodów Zjednoczonych. Metody badawcze opisane w niniejszym przewodniku badawczym pozwalają na ilościowe określenie zmian w ekspresji zestawu genów związanych z procesem aktywacji monocytów i komórek dendrytycznych (sygnatura biomarkerów genomowych) po ekspozycji na markery powierzchniowe komórek lub substancje uczulające.
Norma OECD TG 442E to solidny test in vitro do identyfikacji potencjalnych chemicznych substancji uczulających skórę, o szerokim zastosowaniu i ponad 90-procentowej dokładności predykcyjnej. Test ten dostarcza binarną prognozę, która klasyfikuje próbki testowe jako uczulające lub nieuczulające. Celem tej wytycznej jest określenie, czy substancja chemiczna może powodować uczulenie skóry, tj. alergiczne kontaktowe zapalenie skóry, poprzez aktywację swoistych odpowiedzi immunologicznych bez przeprowadzania badań na zwierzętach.
Test aktywacji linii komórkowej człowieka (h-CLAT) to test in vitro (bez udziału zwierząt) służący do oceny, czy dana substancja chemiczna może powodować uczulenie skóry. Uczulenie skóry to reakcja alergiczna wywołana nadmierną reakcją układu odpornościowego na substancję po kontakcie ze skórą. Test h-CLAT został zaprojektowany w celu modelowania kluczowego etapu biologicznego w rozwoju uczulenia skóry: aktywacji komórek dendrytycznych (rodzaju komórek układu odpornościowego) przez substancję chemiczną o działaniu uczulającym.
Ta metoda badawcza jest ważna, ponieważ zastępuje starsze testy na zwierzętach. Co więcej, norma OECD TG 442E jest ceniona, ponieważ zapewnia znormalizowane, naukowo potwierdzone i akceptowane na całym świecie metody oceny, czy substancje chemiczne powodują uczulenie skóry, czyli reakcję alergiczną wywołaną przez powtarzającą się ekspozycję na substancję.
Metoda h-CLAT pozwala na ilościowe określenie zmian ekspresji markerów powierzchniowych komórek związanych z procesem aktywacji monocytów i komórek dendrytycznych w linii komórkowej ludzkiej białaczki monocytowej THP-1 po ekspozycji na czynniki uczulające. Zmierzone poziomy ekspresji markerów powierzchniowych komórek dendrytycznych są następnie wykorzystywane do rozróżnienia czynników uczulających i odczulających skórę.
Ta metoda to test in vitro, który mierzy zmiany ekspresji markerów powierzchniowych komórek THP-1 w linii komórkowej ludzkiej białaczki monocytowej po 24 godzinach ekspozycji na badaną substancję chemiczną. Te cząsteczki powierzchniowe są typowymi markerami aktywacji THP-1 monocytów i mogą naśladować aktywację komórek dendrytycznych, które odgrywają kluczową rolę w inicjacji limfocytów T. Zmiany ekspresji markerów powierzchniowych mierzy się cytometrią przepływową po barwieniu komórek przeciwciałami znakowanymi fluorochromem. Jednocześnie przeprowadza się pomiar cytotoksyczności w celu oceny, czy wzrost ekspresji markerów powierzchniowych występuje przy stężeniach subcytotoksycznych. Oblicza się względną intensywność fluorescencji markerów powierzchniowych w porównaniu z kontrolą rozpuszczalnik/nośnik, którą wykorzystuje się w modelu predykcyjnym w celu wsparcia rozróżnienia substancji uczulających od nieuczulających.
Krótko mówiąc, wytyczna OECD TG 442 jest niezbędna, aby wspierać etyczne, rzetelne i spójne na całym świecie testy bezpieczeństwa substancji chemicznych i produktów konsumenckich, szczególnie w świetle zmieniających się przepisów i zapotrzebowania społecznego na badania naukowe nietestujące na zwierzętach.
Nasza organizacja, która od lat wspiera przedsiębiorstwa z różnych sektorów, oferując szeroki zakres usług testowych, pomiarowych, analitycznych i ewaluacyjnych, dysponuje silnym zespołem pracowników, którzy uważnie śledzą światowe osiągnięcia w dziedzinie nauki i technologii oraz stale się rozwijają. W tym kontekście świadczymy również usługi testowe dla przedsiębiorstw zgodnie z normą OECD TG 442E – Test aktywacji linii komórkowej ludzkiej (h-CLAT) in vitro w zakresie wrażliwości skóry.
Możesz poprosić nas o wypełnienie formularza, aby umówić się na spotkanie, uzyskać bardziej szczegółowe informacje lub poprosić o ocenę.
