Genotoxicity testing လိုအပ်တဲ့ biocompatibility tests အတွက်သင့်ရဲ့ product type နှင့် data requirements အပေါ်မူတည်ပြီး Ames Mutagenicity, Chromosomal Aberration, Mouse Lymphoma နှင့် Mouse Micronucleus အပါအဝင်မျိုးစုံစမ်းသပ်ခြင်းအမျိုးအစားများကိုကျွန်ုပ်တို့ကမ်းလှမ်းပါတယ်။ ဤစစ်ဆေးမှုများသည် OECD နှင့် ISO လမ်းညွှန်ချက်များနှင့်ကိုက်ညီပြီး genotoxicity အတွက် in vitro test level တစ်ခုဖြစ်သည်။
Ames Mutagenicity စမ်းသပ်မှုကိုဆေးဘက်ဆိုင်ရာစက်ပစ္စည်း / ပစ္စည်းမှထုတ်ယူမှုတစ်ခု၏အလားအလာရှိသော mutagenic လုပ်ဆောင်မှုကိုဆုံးဖြတ်ရန်အသုံးပြုသည်။ Bacterial Reverse Mutation Test (Ames test) သည် genotoxicity battery ၏တစ်စိတ်တစ်ပိုင်းအဖြစ်ဆေးဘက်ဆိုင်ရာပစ္စည်း / ပစ္စည်းမှပေါက်ကြားမှုသည် mutagenic ဟုတ်မဟုတ်စစ်ဆေးရန်ဖြစ်သည်။
Chromosomal Aberration စမ်းသပ်မှုသည်ဆေးဘက်ဆိုင်ရာပစ္စည်းကိရိယာများ / အထောက်အပံ့များကို၎င်းတို့အားတရုတ် Hamster Ovary (CHO) ဆဲလ်များရှိဖွဲ့စည်းတည်ဆောက်ပုံဆိုင်ရာခရိုမိုဆုန်းပုံမှန်မဟုတ်ခြင်းကိုစစ်ဆေးရန်အသုံးပြုသည်။ စစ်ဆေးမှုကိုအမြဲတမ်းလူနာအဆက်အသွယ်၊ ကြာရှည်သောလူနာအဆက်အသွယ်သို့မဟုတ်သွေးအဆက်အသွယ်ရှိသောကိရိယာများ / ပစ္စည်းများပေါ်တွင်ပြုလုပ်သည်။ Chromosomal Aberration စမ်းသပ်မှုသည် OECD နှင့် ISO လမ်းညွှန်ချက်များနှင့်လိုက်လျောညီထွေဖြစ်သည့် genotoxicity အတွက် in vitro testing ၏အဆင့်သုံးဆင့်ဖြစ်သည်။
Mouse Lymphoma စမ်းသပ်ခြင်းသည်မျိုးဗီဇဗီဇပြောင်းလဲခြင်း၊ ခရိုမိုဆုန်းဖွဲ့စည်းပုံနှင့်အရေအတွက်ပြောင်းလဲခြင်းနှင့်ဆေးဘက်ဆိုင်ရာကိရိယာများ၊ ပစ္စည်းသို့မဟုတ်ထုတ်ယူမှုများကြောင့်ဖြစ်ပေါ်လာသောအခြားမျိုးဗီဇအဆိပ်အတောက်များကိုခွဲခြားရန်နို့တိုက်သတ္တဝါများဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုများကိုမကြာခဏအသုံးပြုသည်။ ဤစမ်းသပ်မှုများသည်ခန္ဓာကိုယ်နှင့်ကြာရှည်ထိတွေ့မှုရှိသည့်ကိရိယာများသည်ကင်ဆာဖြစ်နိုင်ခြေရှိသောမျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုကိုဖြစ်ပေါ်စေမည့်မျိုးရိုးဗီဇအဆိပ်အတောက်ကိုဖော်ထုတ်နိုင်ခြင်းမရှိစေရန်သေချာစေရန်အသုံးပြုသည်။
အရွယ်ရောက်ကြွက်များ၏ရိုးတွင်းခြင်ဆီတွင်တွေ့ရသောနု polychromatic erythrocytes အတွက် micronucleus ဖွဲ့စည်းခြင်းကိုသွေးဆောင်ရန် Mouse Micronucleus assay သည်ဆေးဘက်ဆိုင်ရာကိရိယာတစ်ခု၏အလားအလာကိုအကဲဖြတ်ရန်အသုံးပြုသည်။
Ames Mutagenicity
Ames Mutagenicity စမ်းသပ်မှုသည်၎င်းတို့၏လှုံ့ဆော်မှုကိုခံနိုင်ရည်ရှိစေရန်ရွေးချယ်ထားသော Salmonella typhimurium မျိုးကွဲများကိုအသုံးပြုသည်။
စမ်းသပ်မှုပုံစံများသည် histidine ထုတ်လုပ်မှုကိုထိန်းချုပ်သောမျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုကြောင့်ကြီးထွားရန်အတွက် histidine လိုအပ်သည်။
Ames စမ်းသပ်မှုများသည်စမ်းသပ်ပစ္စည်းတစ်ခု၏ထုတ်ယူမှုအားဇီဝသက်ရှိအရာနှင့်ရော။ ရောစပ်။ histidine အနည်းငယ်သာပါ ၀ င်သည်။ Histidine သည် inoculated test organism ကိုအရေအတွက်အကန့်အသတ်ဖြင့် ၀ င်ခွင့်ပြုသည်။ သို့သော်ပုံမှန်ကြီးထွားမှုကိုခွင့်ပြုရန်မလုံလောက်ပါ။
သို့သော်မျိုးကွဲပြောင်းပြန် mutation (စမ်းသပ်ခြင်းပစ္စည်းသို့မဟုတ်အပြုသဘောထိန်းချုပ်မှုပစ္စည်းအားဖြင့်အလိုအလျောက်သို့မဟုတ်သွေးဆောင်), လျှင်, သက်ရှိမရှိတော့ကြီးထွားဖို့ histidine လိုအပ်သည်နှင့်မြင်နိုင်ကိုလိုနီသို့မဟုတ် reverser ထုတ်လုပ်နိုင်သည်။ သာ histidine ဗီဇဒေသအတွက်စမ်းသပ် organism အတွက် mutation စမ်းသပ်သက်ရှိမရှိတော့ histidine လိုအပ်သည်သောသက်ရှိသို့ mutation reverse စေ၏။
စမ်းသပ်မှုမျိုးကွဲ mutagen အမျိုးအစားများကို detect လုပ်ဖို့ရွေးချယ်ထားပါသည်။ အသုံးပြုတဲ့စမ်းသပ်မှုမျိုးကွဲ TA97A, TA98, TA100, TA102 နှင့် TA1535 ဖြစ်ကြသည်။
အစက်အပြောက်စမ်းသပ်မှုကိုလည်းစမ်းသပ်ထုတ်ကုန်၏ကောက်နုတ်ချက်များထုတ်ယူ histidine ပါဝင်သောစမ်းသပ်သက်ရှိသေးငယ်တဲ့ငွေပမာဏင်တစ်ပန်းကန်ပေါ်တွင်စွန်းထားတဲ့အတွက်ဖျော်ဖြေနေသည်။ စမ်းသပ်ပစ္စည်းသည် agar မှတဆင့်ပျံ့နှံ့သည်နှင့်အမျှ၎င်းသည်ပိုမိုရောစပ်လာသည်။ ဤသည် tester မျိုးကွဲအချို့တားစီးစေတဲ့ mutagens ၏ထောက်လှမ်းခွင့်ပြုပါတယ်။ စမ်းသပ်မှုများ S-9 activation နှင့်အတူသို့မဟုတ်မပါဘဲလုပ်ဆောင်နေကြသည်။ S-9 activation system သည်နို့တိုက်သတ္တဝါများအသည်းအင်ဇိုင်းစနစ်များကိုတုပရန်ဒီဇိုင်းပြုလုပ်ထားသည်။
Chromosomal Aberration test ကို CHO ဆဲလ်တွေကိုစမ်းသပ်တဲ့ပစ္စည်းထုတ်ယူမှုနဲ့ထိတွေ့ခြင်းအားဖြင့်ပြုလုပ်သည်။ တစ် ဦး သွေးထွက်အလယ်အလတ်အနုတ်လက္ခဏာထိန်းချုပ်မှုအဖြစ် assay တွင်ပါဝင်သည်။
CHO ဆဲလ်များကို ၇၅ စင်တီမီတာရှိဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုဆိုင်ရာဘူးများတွင်စိုက်ထူပြီးဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုအလတ်စား + ၁၀% သွေးရည်ကြည်နှင့် ၄၀-၆၀% မြစ်ဆုံအထိထည့်သည်။
CHO ဆဲလ်များသည်ဇီဝဖြစ်စဉ်ကိုမြှင့်တင်ပေးသည့်စနစ်၏မရှိခြင်းနှင့်မရှိခြင်းတို့အတွက်စမ်းသပ်မှုထုတ်ကုန်ထုတ်ယူမှုနှင့်ထိတွေ့နိုင်သည်။ ဇီဝဖြစ်စဉ် activation system သည် S9 homogenate, isocitrate နှင့် NADP အရောအနှောဖြစ်သည်။ အသုံးပြုသောအပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှုများမှာဇီဝဖြစ်စဉ်ကိုအသက်သွင်းခြင်းနှင့်အတူ Cyclophosphamide နှင့် Mitomycin C တို့ဖြစ်သည်။
ဆဲလ်ရိတ်သိမ်းခြင်းမပြုမီ, ဆဲလ် cytotoxicity များအတွက်စစ်ဆေးနေကြသည်။ AAMI / ANSI / ISO 10993-5 နှင့် USP <87> နှုန်းအရ 0 - 4 ရှိဆနျ့ကငျြသောစကေးပျေါတှငျထူးခွားသော morphological cytotoxicity ၏အတိုင်းအတာအရဖလားများကိုအမှတ်ပေးသည်။ ပုလင်းသုံးလုံးမှရလဒ်များ၏ပျမ်းမျှအား cytotoxicity ရမှတ်ကိုပေးသည်။
ထိတွေ့မှုနှင့်ဖော်ပြမှုကာလအဆုံးတွင်ဆဲလ်များကို coltazide ဖြင့် metaphase တွင်ဖမ်းဆီးသည်။ ထို့နောက်ဆဲလ်များကိုဖလားများမှဖယ်ထုတ်ပြီး hypotonic solution နှင့် fixative ဖြင့်ကုသသည်။ ဆဲလ်များကိုအဏုကြည့်မှန်ပြောင်းပေါ်တွင်သိုလှောင်ထားသည်။ အဆိုပါခရိုမိုဆုန်း Giemsa အစွန်းအထင်းနှင့်အတူစွန်းနှင့် Permount နှင့်ဖုံးလွှမ်းလျက်ရှိသည်။ ထို့နောက်ဆဲလ်များကိုခရိုမိုဆုန်းပုံမှန်မဟုတ်သောဖြစ်ရပ်များအတွက်အဏုကြည့်မှန်ပြောင်းဖြင့်စစ်ဆေးသည်။
ဇီဝသဟဇာတဖြစ်ခြင်း Genotoxicity test တွင် mouse lymphoma ဆဲလ်များသည်စမ်းသပ်ပစ္စည်းတစ်ခုသည် mutations သို့မဟုတ် clastogenic (chromosomal ပြိုကွဲခြင်း) ကိုယဉ်ကျေးမှုရှိသောနို့တိုက်သတ္တဝါဆဲလ်လိုင်းများကိုသွေးဆောင်နိုင်စွမ်းရှိမရှိဆုံးဖြတ်ရန်အသုံးပြုသည်။ ဤကိစ္စတွင်ပစ်မှတ်ဗီဇ, thymidine kinase (TK), တစ် ဦး dispensable ဗီဇဖြစ်ပါတယ်။ TK လှုပ်ရှားမှုဆုံးရှုံးမှုတစ်ခု mutation ဖြစ်ပွားခဲ့သည်ကြောင်းဖော်ပြသည်။ TK သည် DNA metabolism မှဆင်းသက်လာ thymidine များအတွက်ကယ်ဆယ်ရေးလမ်းကြောင်းတွင်ပါ ၀ င်သောကြောင့်ဆဲလ်များသည် thymidine de novo ကိုဖန်တီးနိုင်သည်။ ထို့ကြောင့် TK ဆုံးရှုံးမှုသည်ဆဲလ်သက်မဲ့များကိုမဖြစ်စေပါ။
Mutant ကို ရွေးချယ်၍ Mutant ကြိမ်နှုန်းကိုစမ်းသပ်ပစ္စည်းနှင့်ထိတွေ့ပြီးနောက်ဆဲလ်များ၏ယဉ်ကျေးမှုအလတ်စားသို့ thymidine analog (trifluorothymidine သို့မဟုတ် TFT) ကိုထည့်သွင်းခြင်းဖြင့်ရရှိနိုင်သည်။ နဂိုအတိုင်း TK နှင့်အတူပုံမှန်ဆဲလ် Analog နှင့် template ကိုပါဝင်သည်; Mutant ဆဲလ်များ (TK လှုပ်ရှားမှုမရှိခြင်း) သည်ရှင်သန်ကာကိုလိုနီများဖြစ်ပေါ်လာသည်။
Mouse Micronucleus စမ်းသပ်မှုတွင်ဆေးဘက်ဆိုင်ရာစက်ကိရိယာကိုပိုလာနှင့်ပိုလီယိုမဟုတ်သောပတ်ဝန်းကျင်တွင်ဖယ်ထုတ်သည်။ စမ်းသပ်ပြီးသားထုတ်ကုန်များမှအပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှုများနှင့်အပျက်သဘောထိန်းချုပ်မှုများကိုယောက်ျားနှင့်မိန်းမနှစ်ယောက်တည်းတွင်ကြွက်များတွင် 20 mL / kg ဖြင့်ထိုးပေးသည်။ ထို့နောက်အရိုးတွင်းခြင်ဆီကိုဆေးသောက်ပြီးနောက် ၂၄ နာရီမှ ၄၈ နာရီအကြာတွင်ရိတ်သိမ်းပြီး micronuclear polychromatic erythrocytes (PCEs) ရှိမရှိစစ်ဆေးသည်။ PCEs များရှိနေခြင်းသည်ထိုကိရိယာမှ mutagenic ပစ္စည်းများကိုထုတ်ဖော်ပြခြင်းဖြစ်သည်။
EUROLABနိုင်ငံတကာ အသိအမှတ်ပြု ဓါတ်ခွဲခန်းများနှင့်အတူ ၎င်း၏ ကျွမ်းကျင်ပညာရှင်အဖွဲ့၊ Genotoxicity စမ်းသပ်မှု ၎င်းသည်စမ်းသပ်ခြင်း၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း၊ တိုင်းတာခြင်း၊ အကဲဖြတ်ခြင်းနှင့်အစီရင်ခံခြင်းမျိုးဆက်ဝန်ဆောင်မှုများအားလုံးကိုလုံး ၀ နှင့်ယုံကြည်စိတ်ချစွာလုပ်ဆောင်သည်။
ရက်ချိန်းယူရန်၊ အသေးစိတ်အချက်အလက်ရယူရန်သို့မဟုတ်အကဲဖြတ်ရန်တောင်းဆိုရန်ကျွန်ုပ်တို့၏ပုံစံကိုဖြည့်ရန်ကျွန်ုပ်တို့အားသင်တောင်းဆိုနိုင်သည်။
