La norma “OECD TG 442E Sensibilización cutánea in vitro – Prueba de activación de líneas celulares humanas (h-CLAT)”, publicada según las directrices de la OCDE sobre conducta empresarial responsable para empresas multinacionales (directrices de la OCDE), se propone abordar la activación de las células dendríticas, un evento clave en la vía de resultados adversos para la sensibilización cutánea.
Esta guía de ensayo aborda el riesgo para la salud humana, como punto final, de sensibilización cutánea tras la exposición a una sustancia de prueba. La sensibilización cutánea se refiere a una respuesta alérgica tras el contacto de la piel con la sustancia de prueba, según la definición del Sistema Globalmente Armonizado de Clasificación y Etiquetado de Productos Químicos de las Naciones Unidas.
Esta norma proporciona cuatro métodos de prueba in vitro que abordan el mismo evento clave en la vía de resultados negativos:
Todos estos métodos se utilizan para facilitar la distinción entre sensibilizantes cutáneos y no sensibilizantes, de acuerdo con el Sistema Globalmente Armonizado de Clasificación y Etiquetado de Sustancias Químicas de las Naciones Unidas. Los métodos de ensayo descritos en esta guía cuantifican los cambios en la expresión de un conjunto de genes asociados con el proceso de activación de monocitos y células dendríticas (firma genómica de biomarcadores) tras la exposición a marcadores de superficie celular o sensibilizadores.
La norma OCDE TG 442E es una prueba in vitro robusta para identificar posibles sensibilizantes químicos de la piel, con amplia aplicabilidad y una precisión predictiva superior al 90 %. Esta prueba proporciona una predicción binaria que clasifica las muestras de prueba como sensibilizantes o no sensibilizantes de la piel. El objetivo de esta guía es determinar si una sustancia química puede causar sensibilización cutánea, es decir, dermatitis alérgica de contacto, al activar respuestas inmunitarias específicas sin realizar pruebas en animales.
La prueba de activación de líneas celulares humanas (h-CLAT) es una prueba in vitro (sin animales) que se utiliza para evaluar si una sustancia química puede causar sensibilización cutánea. La sensibilización cutánea es una reacción alérgica causada por una reacción exagerada del sistema inmunitario a una sustancia tras el contacto con la piel. La h-CLAT está diseñada para modelar un paso biológico clave en el desarrollo de la sensibilización cutánea: la activación de las células dendríticas (un tipo de célula inmunitaria) por una sustancia química sensibilizante.
Este método de prueba es importante porque reemplaza las antiguas pruebas con animales. Además, la norma TG 442E de la OCDE es valiosa porque proporciona métodos estandarizados, validados científicamente y aceptados internacionalmente para evaluar si las sustancias químicas causan sensibilización cutánea, un tipo de reacción alérgica causada por la exposición repetida a la piel.
El método h-CLAT cuantifica los cambios en la expresión de marcadores de superficie celular asociados con el proceso de activación de monocitos y células dendríticas en la línea celular de leucemia monocítica humana THP-1 tras la exposición a sensibilizadores. Los niveles de expresión medidos de los marcadores de superficie celular de las células dendríticas se utilizan posteriormente para facilitar la distinción entre sensibilizadores y desensibilizadores cutáneos.
Este método es un ensayo in vitro que mide los cambios en la expresión de marcadores de superficie celular en células THP-1 de la línea celular de leucemia monocítica humana después de 24 horas de exposición a una sustancia química de prueba. Estas moléculas de superficie son marcadores típicos de la activación de THP-1 monocítico y pueden imitar la activación de las células dendríticas, que desempeñan un papel crítico en la preparación de células T. Los cambios en la expresión de marcadores de superficie se miden por citometría de flujo después de la tinción celular con anticuerpos marcados con fluorocromo. La medición de citotoxicidad se realiza simultáneamente para evaluar si la regulación positiva de la expresión de marcadores de superficie ocurre a concentraciones subcitotóxicas. La intensidad relativa de fluorescencia de los marcadores de superficie en comparación con el control de disolvente/vehículo se calcula y se utiliza en el modelo de predicción para respaldar la distinción entre sensibilizadores y no sensibilizadores.
En resumen, la norma OECD TG 442 es esencial para apoyar pruebas de seguridad éticas, confiables y globalmente consistentes de productos químicos y de consumo, particularmente a la luz de las regulaciones en evolución y la demanda pública de ciencia libre de crueldad.
Nuestra organización, que lleva años apoyando a empresas de todos los sectores mediante una amplia gama de actividades de prueba, medición, análisis y evaluación, cuenta con un sólido equipo de empleados que siguen de cerca los avances científicos y tecnológicos globales y se mejoran constantemente. En este contexto, también ofrecemos servicios de prueba a empresas de acuerdo con la norma OCDE TG 442E Sensibilidad cutánea in vitro - Prueba de activación de líneas celulares humanas (h-CLAT).
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