За тестове за биосъвместимост, изискващи тестване за генотоксичност, ние предлагаме множество видове тестове, включително Ames Mutagenicity, Chromosomal Aberration, Mouse Lymphoma и Mouse Micronucleus, в зависимост от типа на продукта и изискванията за данни. Тези тестове са в съответствие с насоките на OECD и ISO като едно от трите нива на ин витро тестове за генотоксичност.
Тестът за мутагенност на Ames се използва за определяне на потенциалната мутагенна активност на екстракт от медицинско изделие / материал. Тестът за бактериална обратна мутация (тест на Еймс) се извършва като част от генотоксичната батерия от тестове, за да се определи дали изтичането от медицинско изделие / материал е мутагенно.
Тестът за хромозомна аберация се използва за сканиране на медицински устройства / консумативи, за да се определи дали те причиняват структурни хромозомни аномалии в клетките на яйчниците на китайския хамстер (СНО). Тестът се извършва на устройства / материали с постоянен контакт с пациент, продължителен контакт с пациент или контакт с кръв. Тестът за хромозомна аберация е в съответствие с насоките на OECD и ISO като едно от трите нива на ин витро тестване за генотоксичност.
Тестът за лимфом на мишки често използва клетъчни култури на бозайници за идентифициране на генни мутации, промяна в структурата и броя на хромозомите и други генни токсичности, причинени от медицински изделия, материали или екстракти. Тези тестове се използват, за да се гарантира, че устройствата, които имат дългосрочен контакт с тялото, не разкриват генотоксичност, която може да доведе до генни мутации с раков потенциал.
Анализът на миши микронуклеус се използва за оценка на потенциала на медицинско устройство за индуциране на образуване на микроядра в незрели полихроматични еритроцити, открити в костния мозък на възрастни мишки.
Мутагенност на Ames
Тестът за мутагенност на Ames използва няколко щама Salmonella typhimurium, избрани поради тяхната чувствителност към мутация поради:
Тестовите щамове също изискват хистидин за растеж поради мутация в гена, който контролира производството на хистидин.
Тестовете на Ames се извършват чрез смесване на екстракт от изпитваното вещество с тествания организъм в мек агаров разтвор, съдържащ само малко количество хистидин. Хистидинът позволява на инокулирания тестов организъм да влезе в ограничен брой отделения, но е недостатъчен, за да позволи нормален растеж.
Ако обаче щамът е подложен на обратна мутация (спонтанна или индуцирана от изпитваното вещество или материал за положителен контрол), организмът вече не изисква хистидин да расте и може да произведе видима колония или реверс. Мутациите в тествания организъм само в областта на хистидиновия ген карат тествания организъм да обърне мутацията в организъм, който вече не се нуждае от хистидин.
Тестовите щамове са избрани за откриване на различни видове мутаген. Използваните тестови щамове са TA97A, TA98, TA100, TA102 и TA1535.
Извършва се и спот тест, при който екстрактите от тествания продукт се оцветяват върху плака, съдържаща малко количество хистидин, съдържащ тествания организъм. Тъй като тестваното вещество дифузира през агара, то става по-разредено. Това позволява откриването на мутагени, които причиняват известно инхибиране на тестващите щамове. Тестовете се извършват с активиране на S-9 или без активиране на S-9. Системата за активиране S-9 е предназначена да симулира ензимни системи на черния дроб на бозайници и се използва за откриване на вещества, подложени на метаболитно активиране от немутагенни форми.
Тестът за хромозомна аберация се извършва чрез излагане на клетките СНО на екстракта на тестваното вещество. Среда за кървене е включена в анализа като отрицателна контрола.
СНО клетките се засяват в 75 cm 2 колби за клетъчни култури и се инкубират със среда за клетъчна култура + 10% серум до 40-60% сливане.
КНО клетките са изложени на екстракт от тестван продукт в присъствието и отсъствието на метаболитна система за активиране. Системата за метаболитно активиране е смес от S9 хомогенат, изоцитрат и NADP. Използваните положителни контроли са циклофосфамид с метаболитно активиране и митомицин С без метаболитно активиране.
Преди събирането на клетките клетките се изследват за цитотоксичност. Флаконите се оценяват според степента на различима морфологична цитотоксичност в относителна скала от 10993 - 5 за AAMI / ANSI / ISO 87-0 и USP <4>. Средната стойност на резултатите от трите бутилки е осреднена, за да се получи краен резултат за цитотоксичност.
В края на периодите на експозиция и експресия клетките се арестуват с колтазид в метафазата. След това клетките се отстраняват от флаконите и се третират с хипотоничен разтвор и фиксатор. Клетките се отлагат върху предметни стъкла на микроскопи. Хромозомите се оцветяват с оцветяване по Giemsa и се покриват с Permount. След това клетките се изследват микроскопски за хромозомни аномалии.
Биосъвместимост В теста за генотоксичност, клетките на миши лимфом се използват, за да се определи дали тестовият материал е способен да индуцира точкови мутации или кластогенен (хромозомно счупване) в култивирана клетъчна линия на бозайници. В този случай целевият ген, тимидин киназа (ТК), е разпределим ген. Загубата на активност на ТЗ показва, че е настъпила мутация. Тъй като ТЗ участва в спасителен път за тимидин, получен от метаболизма на ДНК, клетките могат да синтезират тимидин de novo. Следователно, загубата на TK не прави клетката неодушевена.
Могат да бъдат избрани мутанти и честотите на мутанти могат да бъдат получени чрез включване на аналога на тимидин (трифлуоротимидин или TFT) в хранителната среда на клетките след излагане на тествания материал. Редовните клетки с непокътнати TK включват аналог и шаблон; Мутантните клетки (без ТК активност) оцеляват, образуват колонии и се определят количествено.
При теста за микронуклеус на мишка медицинското изделие се отстранява в полярна и неполярна среда. Екстрактът от тествания продукт положителни и отрицателни контроли се прилагат при 20 ml / kg както при мъжки, така и при женски мишки. След това костният мозък се събира 24 и 48 часа след дозирането и се изследва за наличие на микроядрени полихроматични еритроцити (PCE). Наличието на PCEs е индикация за изтичането на мутагенно вещество от устройството.
EUROLAB, със своя високо експертен екип и международно акредитирани лаборатории, Тестове за генотоксичност изпълнява всички услуги за тестване, анализ, измерване, оценка и генериране на отчети по пълен и надежден начин.
Можете да ни помолите да попълним формуляра, за да получим среща, да получим по-подробна информация или да поискаме оценка.
