Đối với các xét nghiệm tương thích sinh học yêu cầu kiểm tra độc tính di truyền, chúng tôi cung cấp nhiều loại xét nghiệm, bao gồm Gây đột biến gen, Quang sai nhiễm sắc thể, Lymphoma ở chuột và Hạt nhân vi mô của chuột, tùy thuộc vào loại sản phẩm và yêu cầu dữ liệu của bạn. Các xét nghiệm này tuân thủ các hướng dẫn của OECD và ISO là một trong ba cấp độ xét nghiệm in vitro đối với độc tính di truyền.
Thử nghiệm Khả năng gây đột biến Ames được sử dụng để xác định hoạt tính gây đột biến tiềm ẩn của chiết xuất từ thiết bị / vật liệu y tế. Thử nghiệm đột biến ngược của vi khuẩn (thử nghiệm Ames) được thực hiện như một phần của pin độc tính di truyền để xác định xem rò rỉ từ thiết bị / vật liệu y tế có phải là chất gây đột biến hay không.
Xét nghiệm Quang sai nhiễm sắc thể được sử dụng để quét các thiết bị / vật tư y tế để xác định xem chúng có gây ra các bất thường về cấu trúc nhiễm sắc thể trong tế bào Buồng trứng Hamster Trung Quốc (CHO) hay không. Thử nghiệm được thực hiện trên các thiết bị / vật liệu có tiếp xúc với bệnh nhân thường xuyên, tiếp xúc với bệnh nhân trong thời gian dài hoặc tiếp xúc với máu. Thử nghiệm Quang sai nhiễm sắc thể tuân thủ các hướng dẫn của OECD và ISO là một trong ba cấp độ của thử nghiệm in vitro đối với độc tính di truyền.
Xét nghiệm Lymphoma trên chuột thường sử dụng phương pháp nuôi cấy tế bào động vật có vú để xác định đột biến gen, thay đổi cấu trúc và số lượng nhiễm sắc thể cũng như các độc tính gen khác do thiết bị y tế, vật liệu hoặc chiết xuất gây ra. Các xét nghiệm này được sử dụng để đảm bảo rằng các thiết bị tiếp xúc lâu dài với cơ thể không tiết lộ độc tính di truyền có thể dẫn đến đột biến gen có khả năng gây ung thư.
Thử nghiệm Micronucleus của Chuột được sử dụng để đánh giá tiềm năng của một thiết bị y tế để tạo ra vi nhân trong các hồng cầu đa sắc chưa trưởng thành được tìm thấy trong tủy xương của chuột trưởng thành.
Ames gây đột biến
Thử nghiệm Khả năng gây đột biến của Ames sử dụng một số chủng Salmonella typhimurium được lựa chọn vì tính nhạy cảm với đột biến của chúng do:
Các chủng thử nghiệm cũng yêu cầu histidine để tăng trưởng do đột biến trong gen kiểm soát sản xuất histidine.
Phép thử Ames được thực hiện bằng cách trộn dịch chiết của chất thử với sinh vật thử nghiệm trong dung dịch thạch mềm chỉ chứa một lượng nhỏ histidine. Histidine cho phép sinh vật thử nghiệm được cấy vào một số ngăn hạn chế, nhưng không đủ để cho phép sinh vật phát triển bình thường.
Tuy nhiên, nếu chủng bị đột biến ngược (tự phát hoặc gây ra bởi chất thử nghiệm hoặc vật liệu kiểm soát dương tính), sinh vật không còn yêu cầu histidine để phát triển và có thể tạo ra khuẩn lạc có thể nhìn thấy được hoặc có thể đảo ngược. Các đột biến đối với sinh vật thử nghiệm chỉ trong vùng gen histidine làm cho sinh vật thử nghiệm chuyển ngược đột biến thành một sinh vật không còn cần đến histidine nữa.
Các chủng thử nghiệm được lựa chọn để phát hiện nhiều loại chất gây đột biến khác nhau. Các chủng thử nghiệm được sử dụng là TA97A, TA98, TA100, TA102 và TA1535.
Thử nghiệm tại chỗ cũng được thực hiện trong đó dịch chiết của sản phẩm thử được nhuộm trên đĩa có chứa một lượng nhỏ sinh vật thử nghiệm có chứa histidine. Khi chất thử khuếch tán qua thạch, nó sẽ trở nên loãng hơn. Điều này cho phép phát hiện các đột biến gây ra một số ức chế đối với các chủng thử nghiệm. Các thử nghiệm được thực hiện khi kích hoạt S-9 hoặc không kích hoạt S-9. Hệ thống kích hoạt S-9 được thiết kế để mô phỏng hệ thống enzym gan của động vật có vú và được sử dụng để phát hiện các chất đang được kích hoạt chuyển hóa từ các dạng không gây đột biến.
Thử nghiệm quang sai nhiễm sắc thể được thực hiện bằng cách cho tế bào CHO tiếp xúc với dịch chiết chất thử. Môi trường chảy máu được đưa vào xét nghiệm như một đối chứng âm tính.
Tế bào CHO được cấy giống vào bình nuôi cấy tế bào 75 cm2 và ủ với môi trường nuôi cấy tế bào + 10% huyết thanh cho đến khi hợp lưu 40-60%.
Tế bào CHO được tiếp xúc với dịch chiết sản phẩm thử nghiệm trong sự có mặt và không có hệ thống kích hoạt trao đổi chất. Hệ thống hoạt hóa trao đổi chất là một hỗn hợp của S9 homogenate, isocitrate và NADP. Các đối chứng tích cực được sử dụng là Cyclophosphamide có hoạt hóa chuyển hóa và Mitomycin C không có hoạt hóa chuyển hóa.
Trước khi thu hoạch tế bào, tế bào được kiểm tra độc tính tế bào. Các lọ được chấm điểm theo mức độ độc tế bào hình thái có thể phân biệt được trên thang điểm tương đối 10993-5 cho mỗi AAMI / ANSI / ISO 87-0 và USP <4>. Giá trị trung bình của các kết quả từ ba chai được tính trung bình để cho điểm cuối cùng về độc tính tế bào.
Vào cuối giai đoạn tiếp xúc và biểu hiện, các tế bào bị bắt giữ với coltazide ở giai đoạn chuyển tiếp. Sau đó, các tế bào được lấy ra khỏi lọ và được xử lý bằng dung dịch giảm trương lực và chất cố định. Tế bào được lắng đọng trên các lam kính hiển vi. Các nhiễm sắc thể được nhuộm bằng nhuộm Giemsa và phủ Permount. Các tế bào sau đó được kiểm tra bằng kính hiển vi để tìm các bất thường về nhiễm sắc thể.
Tính tương hợp sinh học Trong thử nghiệm độc tính di truyền, các tế bào ung thư hạch của chuột được sử dụng để xác định xem vật liệu thử nghiệm có khả năng gây đột biến điểm hoặc gây biến dạng (đứt gãy nhiễm sắc thể) trong dòng tế bào động vật có vú được nuôi cấy hay không. Trong trường hợp này, gen đích, thymidine kinase (TK), là một gen không thể thiếu. Mất hoạt động của TK chứng tỏ đột biến đã xảy ra. Vì TK tham gia vào con đường giải cứu thymidine có nguồn gốc từ quá trình chuyển hóa DNA, các tế bào có thể tổng hợp thymidine de novo. Do đó, mất TK không làm cho tế bào trở nên vô tri.
Các đột biến có thể được chọn và các tần số đột biến có thể được tạo ra bằng cách kết hợp chất tương tự thymidine (trifluorothymidine hoặc TFT) vào môi trường nuôi cấy tế bào sau khi tiếp xúc với vật liệu thử nghiệm. Tế bào thông thường có TK nguyên vẹn bao gồm tương tự và tiêu bản; Tế bào đột biến (thiếu TK hoạt động) tồn tại, hình thành khuẩn lạc và định lượng.
Trong thử nghiệm Micronucleus của Chuột, một thiết bị y tế được lấy ra trong môi trường phân cực và không phân cực. Dịch chiết sản phẩm thử nghiệm đối chứng dương tính và đối chứng âm tính được dùng ở 20 mL / kg ở cả chuột đực và chuột cái. Tủy xương sau đó được thu hoạch 24 và 48 giờ sau khi dùng thuốc và kiểm tra sự hiện diện của hồng cầu đa nhân vi sắc (PCE). Sự hiện diện của PCE là một dấu hiệu của chất gây đột biến rò rỉ từ thiết bị.
EUROLAB, với đội ngũ chuyên gia cao và các phòng thí nghiệm được quốc tế công nhận, Xét nghiệm độc tính gen Nó thực hiện tất cả các dịch vụ kiểm tra, phân tích, đo lường, đánh giá và tạo báo cáo hoàn toàn và đáng tin cậy.
Bạn có thể yêu cầu chúng tôi điền vào mẫu của chúng tôi để có được một cuộc hẹn, để có thêm thông tin hoặc yêu cầu đánh giá.
