Untuk ujian keserasian bio yang memerlukan ujian genotoksisitas, kami menawarkan pelbagai jenis ujian, termasuk Ames Mutagenicity, Chromosomal Aberration, Mouse Lymphoma dan Mouse Micronucleus, bergantung pada jenis produk dan keperluan data anda. Ujian ini mematuhi garis panduan OECD dan ISO sebagai salah satu daripada tiga tahap ujian in vitro untuk genotoksisiti.
Ujian Mutagenisiti Ames digunakan untuk menentukan potensi aktiviti mutagenik ekstrak dari alat / bahan perubatan. Ujian Mutasi Balik Bakteria (ujian Ames) dilakukan sebagai sebahagian daripada ujian genotoksisiti untuk menentukan sama ada kebocoran dari alat / bahan perubatan mutagenik.
Ujian Chromosomal Aberration digunakan untuk mengimbas alat / bekalan perubatan untuk menentukan sama ada ia menyebabkan kelainan kromosom struktur pada sel ovari Hamster Cina (CHO). Ujian dilakukan pada alat / bahan dengan kontak pesakit tetap, kontak pesakit yang berpanjangan, atau kontak darah. Ujian Chromosomal Aberration mematuhi garis panduan OECD dan ISO sebagai salah satu daripada tiga tahap ujian in vitro untuk genotoksisiti.
Ujian limfoma tikus sering menggunakan kultur sel mamalia untuk mengenal pasti mutasi gen, perubahan struktur dan bilangan kromosom, dan ketoksikan gen lain yang disebabkan oleh alat perubatan, bahan atau ekstrak. Ujian ini digunakan untuk memastikan bahawa alat yang mempunyai hubungan jangka panjang dengan tubuh tidak mendedahkan genotoksisitas yang dapat menyebabkan mutasi gen dengan potensi barah.
Uji tikus Mikronukleus digunakan untuk menilai potensi alat perubatan untuk mendorong pembentukan mikronukleus pada eritrosit polikromatik yang belum matang yang terdapat di sumsum tulang tikus dewasa.
Ames Mutagenisiti
Ujian Amagen Mutagenisiti menggunakan beberapa strain Salmonella typhimurium yang dipilih kerana kerentanan mereka terhadap mutasi kerana:
Strain ujian juga memerlukan histidin untuk pertumbuhan kerana mutasi pada gen yang mengawal pengeluaran histidin.
Ujian Ames dilakukan dengan mencampurkan ekstrak bahan ujian dengan organisma ujian dalam larutan agar lembut yang hanya mengandungi sedikit histidin. Histidine membolehkan organisma ujian yang diinokulasi memasuki sebilangan kompartemen, tetapi tidak mencukupi untuk memungkinkan pertumbuhan normal.
Walau bagaimanapun, jika ketegangan mengalami mutasi terbalik (spontan atau disebabkan oleh bahan ujian atau bahan kawalan positif), organisme tidak lagi memerlukan histidin untuk tumbuh dan dapat menghasilkan koloni yang kelihatan atau boleh diterbalikkan. Mutasi pada organisma ujian hanya di kawasan gen histidin menyebabkan organisma ujian membalikkan mutasi menjadi organisma, yang tidak lagi memerlukan histidin.
Strain ujian dipilih untuk mengesan pelbagai jenis mutagen. Strain ujian yang digunakan adalah TA97A, TA98, TA100, TA102 dan TA1535.
Ujian spot juga dilakukan di mana ekstrak produk ujian diwarnai pada piring yang mengandungi sejumlah kecil organisma ujian yang mengandung histidin. Oleh kerana bahan uji meresap melalui agar, ia menjadi lebih cair. Ini membolehkan pengesanan mutagen yang menyebabkan beberapa penghambatan strain penguji. Ujian dilakukan dengan pengaktifan S-9 atau tanpa pengaktifan S-9. Sistem pengaktifan S-9 dirancang untuk mensimulasikan sistem enzim hati mamalia dan digunakan untuk mengesan bahan yang mengalami pengaktifan metabolik dari bentuk bukan mutagenik.
Ujian Chromosomal Aberration dilakukan dengan mendedahkan sel CHO ke ekstrak bahan ujian. Medium pendarahan dimasukkan dalam ujian sebagai kawalan negatif.
Sel CHO dibenamkan dalam labu sel kultur sel 75 cm2 dan diinkubasi dengan medium kultur sel + 10% serum hingga pertemuan 40-60%.
Sel CHO terdedah kepada ekstrak produk ujian dengan adanya dan tidak adanya sistem pengaktifan metabolik. Sistem pengaktifan metabolik adalah campuran S9 homogenate, isocitrate dan NADP. Kontrol positif yang digunakan adalah Cyclophosphamide dengan pengaktifan metabolik dan Mitomycin C tanpa pengaktifan metabolik.
Sebelum pengambilan sel, sel diperiksa untuk sitotoksisitas. Vial diberi skor mengikut tahap sitotoksisiti morfologi yang dapat dibezakan pada skala relatif 10993 - 5 mengikut AAMI / ANSI / ISO 87-0 dan USP <4>. Rata-rata hasil dari ketiga botol tersebut rata-rata memberikan skor sitotoksisiti akhir.
Pada akhir tempoh pendedahan dan ekspresi, sel ditangkap pada metafasa dengan coltazide. Sel kemudian dikeluarkan dari botol dan dirawat dengan larutan hipotonik dan fiksatif. Sel disimpan pada slaid mikroskop. Kromosom diwarnai dengan noda Giemsa dan ditutup dengan Permount. Sel-sel kemudian diperiksa secara mikroskopik untuk mengetahui kelainan kromosom.
Biokompatibiliti Dalam ujian genotoksisitas, sel limfoma tikus digunakan untuk menentukan sama ada bahan ujian mampu mendorong mutasi titik atau klastogenik (kerusakan kromosom) pada garis sel mamalia yang dikultur. Dalam kes ini, gen sasaran, thymidine kinase (TK), adalah gen yang dapat diedarkan. Kehilangan aktiviti TK menunjukkan bahawa mutasi telah berlaku. Oleh kerana TK terlibat dalam jalan penyelamatan thymidine yang berasal dari metabolisme DNA, sel dapat mensintesis thymidine de novo. Oleh itu, kehilangan TK tidak menjadikan sel mati.
Mutan boleh dipilih dan frekuensi mutan dapat diperoleh dengan memasukkan analog thymidine (trifluorothymidine atau TFT) ke dalam media kultur sel setelah terdedah kepada bahan ujian. Sel biasa dengan TK utuh merangkumi analog dan templat; Sel mutan (kurang aktiviti TK) bertahan, membentuk koloni dan mengukur.
Dalam ujian Mouse Micronucleus, alat perubatan dikeluarkan di persekitaran polar dan bukan polar. Hasil ujian ekstrak kawalan positif dan kawalan negatif diberikan pada 20 mL / kg pada tikus lelaki dan betina. Sumsum tulang kemudiannya dituai 24 dan 48 jam selepas pemberian dos dan diperiksa untuk mengetahui adanya eritrosit mikronuklear polikromatik (PCE). Kehadiran PCE adalah petunjuk bahawa bahan mutagenik bocor dari peranti.
EUROLAB, dengan pasukannya yang sangat pakar dan makmal yang diiktiraf antarabangsa, Ujian Genotoksisiti Ia melaksanakan semua perkhidmatan ujian, analisis, pengukuran, penilaian dan pembuatan laporan secara lengkap dan boleh dipercayai.
Anda boleh meminta kami mengisi borang kami untuk mendapatkan temujanji, mendapatkan maklumat terperinci atau meminta penilaian.
