La prueba de endotoxinas bacterianas (BET) es un ensayo in vitro para la detección y cuantificación de endotoxinas bacterianas, un componente de la pared celular de las bacterias gram negativas. BET se realiza como parte de la prueba de liberación de lotes para dispositivos médicos que tienen contacto directo o indirecto con el sistema cardiovascular, el sistema linfático o el líquido cefalorraquídeo. Los productos farmacéuticos inyectables también deben analizarse para detectar endotoxinas bacterianas. El monitoreo de rutina de los sistemas de agua y los materiales entrantes puede garantizar que el proceso no agregue endotoxinas al producto final.
Este experimento también se conoce como prueba de lisado de amebocitos de Limulus (LAL) y a veces se denomina prueba de pirógenos (porque las endotoxinas bacterianas pueden causar fiebre en mamíferos, incluidos los humanos). Sin embargo, BET no debe confundirse con la prueba de pirógenos en conejo descrita en la sección <151> de la USP.
Todas las pruebas cumplen con los requisitos especificados en la sección <85> de la USP, sección <161> de la USP, ANSI / AAMI ST72: 2011, EP 2.6.14, JP 4.01 y la Guía de la FDA para la prueba de pirógenos y endotoxinas de la industria: preguntas y respuestas.
EUROLABes el líder de la industria en pruebas de endotoxinas bacterianas. Para las pruebas de rutina, los resultados suelen estar disponibles dentro de los cuatro días hábiles posteriores a la recolección de la muestra. Nuestras validaciones y desarrollo de métodos se realizan en detalle a través de un proceso que ha demostrado ser efectivo y conforme. Con más de 25 años de experiencia, estaremos encantados de resolver sus preguntas sobre los criterios de prueba y también podemos ayudar en la investigación de fallas y la evaluación del proceso de producción.
La prueba de endotoxinas bacterianas se puede realizar mediante métodos de prueba cinética turbidimétrica, cinética cromogénica o de coágulo de gel. Sin embargo, los métodos de prueba cinéticos tienen ventajas significativas sobre las pruebas de coágulos en gel.
Extracción de muestras: La extracción de los instrumentos se realiza con agua libre de endotoxinas detectables. El proceso de extracción consiste en enjuagar los instrumentos con una cantidad mínima de líquido para asegurar una correcta eliminación. Los instrumentos con un conducto de fluido no pirógeno se extraen enjuagando dicho conducto con líquido de extracción calentado a 37 ± 1 °C y evitando el contacto durante al menos una hora. La inmersión de los instrumentos se realiza enjuagándolos en líquido de extracción a 37-40 °C durante más de 60 minutos con agitación intermitente en un agitador orbital.
Procedimiento de prueba: Una prueba BET consiste en analizar una muestra líquida o un extracto de muestra utilizando lisado de amebocitos de Limulus (LAL). El LAL es un reactivo elaborado a partir de la sangre del cangrejo herradura. En presencia de endotoxinas bacterianas, el lisado reacciona formando un coágulo o, según la técnica, provocando un cambio de color. La muestra de prueba se compara con una curva estándar elaborada a partir de concentraciones conocidas de endotoxinas. Todas las pruebas se realizan al menos dos veces. Cada prueba incluye un control positivo y un control negativo.
Validación: Es necesario demostrar que la muestra de prueba no interfiere con la capacidad de detectar endotoxinas. Esto se logra mediante un control positivo del producto (también conocido como recuperación de la muestra marcada) para los métodos de prueba cinética y un experimento independiente de inhibición y potenciación para el método de coagulación en gel.
Las muestras que requieran un proceso como reconstitución, desnaturalización por calor, centrifugación o filtración en un solvente que no sea agua deben validarse para demostrar que el tratamiento no produce pérdida de endotoxinas. Esto se logra inoculando la muestra con endotoxinas y sometiendo la muestra vacunada al tratamiento seleccionado.
El límite de endotoxinas para dispositivos médicos no es superior a 20.0 AU / dispositivo si el dispositivo no está en contacto con líquido cefalorraquídeo, en cuyo caso el límite es 2.15 AU / dispositivo. Es posible que los implantes oftálmicos y los OVD deban cumplir con un límite inferior de 0.2 AB / dispositivo o 0.2 AB / ml. Los límites de endotoxinas para productos farmacéuticos se basan en la dosis máxima que se puede administrar durante un período de 1 hora.
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