AOAC 991.43 食品中总膳食纤维、可溶性膳食纤维和不溶性膳食纤维的测定 - 酶-重量法 MES-TRIS Bufler A
根据美国官方分析化学家协会 (AOAC) 制定的“AOAC 991.43 食品中总膳食纤维、可溶性膳食纤维和不溶性膳食纤维——酶法-重量法 MES-TRIS Bufler A”标准，取两份干燥食品样品（若脂肪含量超过 10%，则需脱脂），依次使用耐热 α-淀粉酶、蛋白酶和葡糖淀粉酶进行酶解，以去除淀粉和蛋白质。测定总膳食纤维时，先用酒精处理酶解产物以沉淀可溶性膳食纤维，然后过滤；将总膳食纤维残渣用酒精和丙酮洗涤，干燥后称重。测定不溶性膳食纤维和可溶性膳食纤维时，先过滤酶解产物，然后用温水洗涤残留的不溶性膳食纤维，干燥后称重。测定可溶性膳食纤维时，将滤液和残渣合并，用酒精沉淀，过滤，干燥后称重。总膳食纤维、不溶性膳食纤维和可溶性膳食纤维的残差值已根据蛋白质、灰分和空隙进行了校正。
测试中使用以下设备：
- 烧杯：400 或 600 毫升（任何形状）。
- 过滤坩埚：烧结圆盘，粗粒，孔径 ASTM 40-60 μm，60 mL Pyrex 材质。制备方法如下：将其置于灰炉中，在 525 摄氏度下煅烧过夜。取出坩埚前，待炉温降至 130 摄氏度以下。然后将坩埚浸泡在 2% 的清洗液中，室温下浸泡 1 小时。
坩埚先用普通水冲洗，再用去离子水冲洗。最后用15 mL丙酮冲洗，然后风干。向干燥的坩埚中加入约1,0 g硅藻土，并在130℃下干燥至恒重。将坩埚置于干燥剂中冷却约1小时，记录坩埚加硅藻土的总重量，精确到0,1 mg。
- 真空系统：带调节装置的真空泵或抽吸器。带侧臂的1升厚壁过滤瓶。用于过滤的橡胶环适配器。口罩。
- 摇床式水浴：配备自动开关定时器，可将温度维持在98度±2度。也可设置恒温至60度。
- 天平：分析天平，精度为±0,1毫克。
- 马弗炉：可保持 525 度正负 5 度的温度。
- 烤箱：可保持温度在 105 至 130 摄氏度之间，误差为正负 3 度。
- 干燥剂：二氧化硅或同等干燥剂。每两周将干燥剂在130度下干燥过夜。
- pH计：温度补偿，pH值用4、0、7、0和10、0的缓冲溶液标准化。
- 移液器：配有一次性吸头。容量分别为 100-300 µL 和 5 mL。
- 分销商。
- 磁力搅拌器和搅拌棒。
AOAC 991.43 标准是目前公认最广泛、历史意义最重大的膳食纤维测定正式方法之一。自 1991 年首次发布以来，该方法一直是膳食纤维分析的基石。在此标准出现之前，膳食纤维通常仅以粗纤维的形式进行测定。AOAC 920.86 标准中描述的方法严重低估了膳食纤维的真实含量，仅能测定少量纤维素和木质素，却会丢失大部分半纤维素、果胶、树胶和抗性淀粉。
AOAC 991.43 标准旨在提供更符合生理学的测量方法，更好地反映人体小肠中实际难以消化的物质（膳食纤维的生理定义），并已成为全球数百万份营养标签上膳食纤维值的基础。
该方法结合了酶解和重量测定：
- 样品制备：双份测试样品用耐热α-淀粉酶进行明胶化。
- 酶促消化：蛋白酶（用于去除蛋白质）和糖化酶（用于将可消化的淀粉水解成葡萄糖）模拟人体消化条件（pH 值、温度和持续时间与口腔、胃和小肠中的条件相似）。
- 膳食纤维沉淀：加入乙醇（4 体积）沉淀可溶性膳食纤维聚合物，并去除消化物质。
- 过滤和洗涤：将残渣（含有总膳食纤维）过滤，用乙醇和丙酮洗涤，干燥，然后称重。
- 蛋白质和灰分校正：分析一对样品中的残余蛋白质，另一对样品中的灰分；将二者相减，得到校正后的总膳食纤维。
- 可溶性膳食纤维和不溶性膳食纤维的分离（可选）：在乙醇沉淀之前，可以先过滤消化产物。过滤后的残渣即为不溶性膳食纤维。然后用乙醇沉淀滤液以回收可溶性膳食纤维。总膳食纤维 = 不溶性膳食纤维 + 可溶性膳食纤维。
该方法的基本特点如下：
- 它同时测量可溶性膳食纤维和不溶性膳食纤维。
- 它含有抗性淀粉，这种淀粉不易被酶消化。
- DP 含有大部分不可消化的寡糖，其中前 10 种寡糖含量最低（因为它们会在 78% 乙醇中沉淀）。
- DP 不包括不可消化的寡糖 3-9，这些寡糖需要单独的方法。
该方法的优点如下：
- 设备相对简单（无需高效液相色谱仪）。
- 各实验室均获得稳健且可重复的结果。
- 全面的验证数据和实验室间研究。
- 它测量的是生理相关的纤维。
目前实际应用：
- 在许多尚未采用新的食品法典/FDA定义的国家，它仍然被用作参考方法。
- 在研究中，当比较历史数据时，经常会用到这种方法。
- 对于谷物制品、蔬菜和传统高纤维食品，许多实验室更喜欢差异最小的新方法。
多年来，凭借我们经验丰富的专业团队，我们始终了解客户的需求，提供他们所需的先进检测服务，并协助他们建立、实施和改进管理体系。在此框架下，我们还根据“AOAC 991.43 食品中总膳食纤维、可溶性膳食纤维和不溶性膳食纤维 - 酶法-重量法 MES-TRIS Bufler A”标准为企业提供检测服务。
