O Teste de Endotoxinas Bacterianas (BET) é um ensaio in vitro para a detecção e quantificação de endotoxinas bacterianas, um componente da parede celular de bactérias Gram negativas. O BET é realizado como parte do teste de liberação do lote para dispositivos médicos que têm contato direto ou indireto com o sistema cardiovascular, sistema linfático ou fluido cerebrospinal. Produtos farmacêuticos injetáveis também devem ser testados para endotoxinas bacterianas. O monitoramento de rotina dos sistemas de água e materiais recebidos pode garantir que o processo não está adicionando endotoxinas ao produto final.
Este experimento também é conhecido como teste Limulus Amebocyte Lysate (LAL) e às vezes é chamado de teste de pirogênio (porque as endotoxinas bacterianas podem causar febre em mamíferos, incluindo humanos). No entanto, BET não deve ser confundido com o teste de pirogênio em coelho descrito na seção <151> da USP.
Todos os testes atendem aos requisitos descritos na seção USP <85>, seção USP <161>, ANSI / AAMI ST72: 2011, EP 2.6.14, JP 4.01 e o Guia FDA para Teste de Pirogênio e Endotoxina da Indústria: Perguntas e Respostas.
EUROLABé líder do setor em testes de endotoxinas bacterianas. Para testes de rotina, os resultados normalmente ficam disponíveis dentro de quatro dias úteis após a coleta da amostra. Nossas validações e desenvolvimento de métodos são feitos detalhadamente por meio de um processo que se mostrou eficaz e compatível. Com mais de 25 anos de experiência, temos prazer em solucionar suas dúvidas em relação aos critérios de teste e também podemos auxiliar na investigação de falhas e avaliação do processo produtivo.
O teste de endotoxinas bacterianas pode ser feito por métodos de teste cinético turbidimétrico, cinético cromogênico ou de coágulo em gel. No entanto, os métodos de teste cinético têm vantagens significativas sobre o teste de coágulo em gel.
Extração de amostras: A extração dos instrumentos é realizada utilizando água isenta de endotoxinas detectáveis. O processo de extração envolve a lavagem e/ou enxágue dos instrumentos com uma quantidade mínima de líquido para garantir a remoção adequada. Instrumentos com via de fluido apirogênica são removidos lavando-se a via de fluido relevante com fluido de extração aquecido a 37 ± 1 °C e evitando o contato por no mínimo uma hora. A imersão dos instrumentos é realizada lavando-os em fluido de extração a 37-40 °C por mais de 60 minutos, com agitação intermitente em um agitador orbital.
Procedimento do teste: O teste BET envolve a análise de uma amostra líquida ou extrato de amostra utilizando o Lisado de Amebócitos de Limulus (LAL). O LAL é um reagente produzido a partir do sangue do caranguejo-ferradura. Na presença de endotoxinas bacterianas, o lisado reage formando um coágulo ou, dependendo da técnica, provoca uma mudança de cor. A amostra testada é comparada a uma curva padrão construída a partir de concentrações conhecidas de endotoxinas. Todos os testes são realizados pelo menos duas vezes. Um controle positivo e um controle negativo são incluídos em cada teste.
Validação: É necessário demonstrar que a amostra testada não interfere na capacidade de detecção de endotoxinas. Isso é feito por meio de um controle positivo do produto (também conhecido como recuperação de fortificação) para métodos de teste cinéticos e um experimento separado de inibição e potencialização para o método de coagulação em gel.
As amostras que requerem um processo como reconstituição, desnaturação por calor, centrifugação ou filtração em um solvente diferente de água devem ser validadas para mostrar que o tratamento não resulta em perda de endotoxina. Isso é realizado inoculando a amostra com endotoxinas e submetendo a amostra vacinada ao tratamento selecionado.
O limite de endotoxinas para dispositivos médicos não é superior a 20.0 UA / dispositivo se o dispositivo não estiver em contato com o líquido cefalorraquidiano; nesse caso, o limite é 2.15 UA / dispositivo. Os implantes oftálmicos e OVDs podem precisar atingir um limite inferior de 0.2 AB / dispositivo ou 0.2 AB / mL. Os limites de endotoxinas para produtos farmacêuticos são baseados na dose máxima que pode ser administrada em um período de 1 hora.
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