Der Bacterial Endotoxins Assay (BET) ist ein In-vitro-Assay zum Nachweis und zur Quantifizierung von bakteriellen Endotoxinen, einem Bestandteil der Zellwand gramnegativer Bakterien. BET wird im Rahmen der Chargenfreigabeprüfung für Medizinprodukte durchgeführt, die direkten oder indirekten Kontakt mit dem Herz-Kreislauf-System, dem Lymphsystem oder der Gehirn-Rückenmarks-Flüssigkeit haben. Auch injizierbare Arzneimittel sollten auf bakterielle Endotoxine getestet werden. Eine routinemäßige Überwachung der Wassersysteme und eingehenden Materialien kann sicherstellen, dass der Prozess keine Endotoxine in das Endprodukt einbringt.
Dieser Test ist auch als Limulus-Amöbozyten-Lysat-Test (LAL) bekannt und wird manchmal auch Pyrogentest genannt (da bakterielle Endotoxine bei Säugetieren, einschließlich Menschen, Fieber verursachen können). Allerdings sollte BET nicht mit dem im USP-Abschnitt <151> beschriebenen Kaninchen-Pyrogentest verwechselt werden.
Alle Tests erfüllen die Anforderungen gemäß USP-Abschnitt <85>, USP-Abschnitt <161>, ANSI/AAMI ST72: 2011, EP 2.6.14, JP 4.01 und den FDA-Richtlinien für industrielle Pyrogen- und Endotoxintests: Fragen und Antworten.
EUROLABist der Branchenführer im Bereich bakterieller Endotoxintests. Bei Routinetests liegen die Ergebnisse in der Regel innerhalb von vier Werktagen nach der Probenentnahme vor. Unsere Validierungen und Methodenentwicklung erfolgen im Detail durch einen Prozess, der sich als effektiv und konform erwiesen hat. Mit über 25 Jahren Erfahrung beantworten wir gerne Ihre Fragen zu Prüfkriterien und unterstützen Sie auch bei der Fehlersuche und Bewertung des Produktionsprozesses.
Der Test auf bakterielle Endotoxine kann mit kinetischen turbidimetrischen, kinetischen chromogenen oder Gelgerinnseltestmethoden durchgeführt werden. Kinetische Testmethoden haben jedoch erhebliche Vorteile gegenüber Gelgerinnseltests.
Probenextraktion: Die Extraktion der Instrumente erfolgt mit endotoxinfreiem Wasser. Dabei werden die Instrumente mit einer minimalen Flüssigkeitsmenge gespült, um eine vollständige Entfernung der Verunreinigungen zu gewährleisten. Instrumente mit pyrogenfreiem Flüssigkeitsweg werden durch Spülen des entsprechenden Flüssigkeitswegs mit auf 37 ± 1 °C erwärmter Extraktionsflüssigkeit und anschließendes Unterbrechen des Kontakts für mindestens eine Stunde gereinigt. Die Instrumentenimmersion erfolgt durch Spülen der Instrumente in Extraktionsflüssigkeit bei 37–40 °C für mehr als 60 Minuten unter intermittierendem Vortexen in einem Orbitalschüttler.
Testverfahren: Bei einem bakteriellen Endotoxintest (BET) wird eine flüssige Probe oder ein Probenextrakt mithilfe von Limulus-Amöbozytenlysat (LAL) analysiert. LAL ist ein Reagenz, das aus dem Blut des Pfeilschwanzkrebses gewonnen wird. In Gegenwart bakterieller Endotoxine reagiert das Lysat mit der Bildung eines Gerinnsels oder, je nach Testverfahren, mit einem Farbumschlag. Die Testprobe wird mit einer Standardkurve verglichen, die auf bekannten Endotoxinkonzentrationen basiert. Alle Tests werden mindestens zweimal durchgeführt. Jeder Test beinhaltet eine positive Produktkontrolle und eine negative Kontrolle.
Validierung: Es muss nachgewiesen werden, dass die Testprobe die Detektion von Endotoxinen nicht beeinträchtigt. Dies geschieht durch eine positive Produktkontrolle (auch Spike-Recovery genannt) bei kinetischen Testmethoden und durch ein separates Hemmungs- und Verstärkungsexperiment bei der Gelgerinnungsmethode.
Proben, die einer Behandlung wie Rekonstitution, Hitzedenaturierung, Zentrifugation oder Filtration in einem anderen Lösungsmittel als Wasser bedürfen, sollten validiert werden, um nachzuweisen, dass die Behandlung nicht zu einem Endotoxinverlust geführt hat. Dies wird erreicht, indem die Probe mit Endotoxinen beimpft und die beimpfte Probe der gewählten Behandlung unterzogen wird.
Der Endotoxin-Grenzwert für Medizinprodukte beträgt maximal 20.0 EU/Gerät, wenn das Gerät nicht mit der Gehirn-Rückenmarks-Flüssigkeit in Kontakt kommt, dann liegt der Grenzwert bei 2.15 EU/Gerät. Augenimplantate und OVDs müssen möglicherweise einen unteren Grenzwert von 0.2 AB/Gerät oder 0.2 AB/ml einhalten. Endotoxin-Grenzwerte für pharmazeutische Produkte basieren auf der maximalen Dosis, die in einem Zeitraum von einer Stunde verabreicht werden kann.
EUROLABmit seinem hochqualifizierten Team und international akkreditierten Laboren, Bakterieller Endotoxin-Test führt alle Test-, Analyse-, Mess-, Bewertungs- und Berichterstellungsdienste vollständig und zuverlässig durch.
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