AOAC 991.43 Serat Pangan Total, Larut dan Tidak Larut dalam Makanan - Metode Enzimatis-Gravimetrik MES-TRIS Buffer A

Menurut standar “AOAC 991.43 Total, serat makanan larut dan tidak larut dalam makanan - Metode enzimatik-gravimetrik MES-TRIS Bufler A” yang dikembangkan oleh Asosiasi Resmi Ahli Kimia Analitik (AOAC), dua sampel masing-masing makanan kering (dihilangkan lemaknya jika mengandung lebih dari 10% lemak) dikenai pencernaan enzimatik berurutan dengan α-amilase tahan panas, protease, dan amiloglukoosidase untuk menghilangkan pati dan protein. Untuk serat makanan total, produk pencernaan enzim diolah dengan alkohol untuk mengendapkan serat makanan larut sebelum penyaringan, dan residu serat makanan total dicuci dengan alkohol dan aseton, dikeringkan, dan ditimbang. Untuk serat makanan tidak larut dan larut, produk pencernaan enzim disaring, dan residu serat makanan tidak larut dicuci dengan air hangat, dikeringkan, dan ditimbang. Untuk serat makanan larut, gabungan filter dan residu diendapkan dengan alkohol, disaring, dikeringkan, dan ditimbang. Nilai residu serat makanan total, serat makanan tidak larut, dan serat makanan larut dikoreksi berdasarkan protein, abu, dan ruang kosong.

Peralatan berikut digunakan dalam pengujian:

• Gelas beker: 400 atau 600 mL (dalam bentuk apa pun).
• Cawan penyaring: Cakram sinter, butiran kasar, ukuran pori ASTM 40-60 μm, Pyrex 60 mL. Persiapannya sebagai berikut: Cawan dibakar semalaman dalam tungku abu pada suhu 525 derajat. Sebelum mengeluarkan cawan, suhu tungku dibiarkan turun di bawah 130 derajat. Cawan kemudian direndam dalam larutan pembersih 2% pada suhu kamar selama 1 jam.

Cawan lebur dibilas dengan air biasa dan kemudian dengan air deionisasi. 15 mL aseton digunakan untuk pembilasan terakhir, lalu dikeringkan dengan udara. Sekitar 1,0 g Celite ditambahkan ke cawan lebur yang kering dan dikeringkan pada suhu 130 derajat hingga beratnya konstan. Cawan lebur didinginkan dalam pengering selama kurang lebih 1 jam, dan berat cawan lebur ditambah Celite dicatat hingga ketelitian 0,1 mg.

• Sistem vakum: Pompa vakum atau aspirator dengan alat pengatur. Botol filter berdinding tebal 1 L dengan lengan samping. Adaptor cincin karet untuk digunakan dengan filtrasi. Masker.
• Pemanas air getar: Dengan pengatur waktu hidup/mati otomatis, pemanas ini dapat mempertahankan suhu 98 derajat plus/minus 2 derajat. Suhu konstan dapat diatur hingga 60 derajat.
• Timbangan: Analitis, akurasi plus/minus 0,1 mg.
• Oven muffle: Dapat mempertahankan suhu 525 derajat plus/minus 5 derajat.
• Oven: Dapat mempertahankan suhu antara 105 dan 130 derajat Celcius plus/minus 3 derajat.
• Bahan pengering: Silikon dioksida atau bahan pengering yang setara. Setiap dua minggu, bahan pengering dikeringkan semalaman pada suhu 130 derajat.
• Pengukur pH: Dikompensasi suhu, nilai pH distandarisasi dengan larutan penyangga 4,0, 7,0 dan 10,0.
• Pipet: Dengan ujung sekali pakai. Kapasitas 100-300 µL dan 5 mL.
• Distributor.
• Pengaduk magnetik dan batang pengaduk.

Standar AOAC 991.43 adalah salah satu metode formal yang paling dikenal luas dan signifikan secara historis untuk menentukan serat makanan dalam makanan. Sejak publikasi pertamanya pada tahun 1991, metode ini telah menjadi landasan analisis serat makanan. Sebelum standar ini, serat makanan umumnya hanya diukur sebagai serat kasar. Metode yang dijelaskan dalam standar AOAC 920.86 sangat meremehkan kandungan serat makanan yang sebenarnya, hanya menangkap sebagian kecil selulosa dan lignin sementara kehilangan sebagian besar hemiselulosa, pektin, gom, dan pati resisten.

Standar AOAC 991.43 dikembangkan untuk memberikan pengukuran yang lebih akurat secara fisiologis yang lebih mencerminkan apa yang sebenarnya resisten terhadap pencernaan di usus kecil manusia (definisi fisiologis serat makanan), dan telah menjadi dasar untuk nilai serat makanan pada jutaan label nutrisi di seluruh dunia.

Metode ini menggunakan kombinasi pencernaan enzimatik dan penentuan gravimetrik:

• Persiapan sampel: Sampel uji ganda digelatinisasi dengan α-amilase tahan panas.
• Pencernaan enzimatik: Enzim protease (untuk menghilangkan protein) dan amiloglukosa (untuk menghidrolisis pati yang dapat dicerna menjadi glukosa) mensimulasikan kondisi pencernaan manusia (pH, suhu, dan durasi yang mirip dengan yang ada di mulut, lambung, dan usus kecil).
• Pengendapan serat makanan: Etanol (4 volume) ditambahkan untuk mengendapkan polimer serat makanan larut dan menghilangkan zat yang telah dicerna.
• Penyaringan dan pencucian: Residu (yang mengandung total serat makanan) disaring, dicuci dengan etanol dan aseton, dikeringkan, dan ditimbang.
• Koreksi protein dan abu: Satu pasang sampel dianalisis untuk protein residu, yang lainnya untuk abu; keduanya dikurangkan untuk mendapatkan total serat makanan yang telah dikoreksi.
• Pemisahan serat larut dan tidak larut secara opsional: Sebelum pengendapan etanol, produk pencernaan dapat disaring. Residu yang tersisa setelah penyaringan = serat makanan tidak larut. Filtrat kemudian diendapkan dengan etanol untuk mendapatkan kembali serat makanan larut. Total serat makanan = Serat makanan tidak larut + serat makanan larut.

Karakteristik dasar dari metode ini adalah sebagai berikut:

• Alat ini mengukur serat makanan yang larut dan tidak larut.
• Produk ini mengandung pati resisten yang tahan terhadap pencernaan enzim.
• DP mengandung sebagian besar oligosakarida yang tidak dapat dicerna, dengan jumlah terendah berada pada 10 teratas (karena mengendap dalam etanol 78%).
• DP tidak termasuk oligosakarida yang tidak dapat dicerna 3-9, yang memerlukan metode terpisah.

Keunggulan metode ini adalah sebagai berikut:

• Peralatan yang relatif sederhana (tidak memerlukan HPLC).
• Hasil yang kuat dan dapat direproduksi di berbagai laboratorium.
• Data validasi komprehensif dan studi antar laboratorium.
• Alat ini mengukur serat-serat yang relevan secara fisiologis.

Penggunaan praktis saat ini:

• Metode ini masih digunakan sebagai metode referensi di banyak negara yang belum mengadopsi definisi Codex/FDA yang baru.
• Hal ini sering digunakan dalam penelitian ketika membandingkan data historis.
• Metode baru, yang perbedaannya minimal, lebih disukai oleh banyak laboratorium untuk produk biji-bijian, sayuran, dan makanan tradisional tinggi serat.

Selama bertahun-tahun, organisasi kami, dengan staf yang kompeten dan berpengalaman, telah memahami kebutuhan klien, menyediakan layanan pengujian canggih yang mereka butuhkan, dan membantu dalam pembentukan, implementasi, dan peningkatan sistem manajemen. Dalam kerangka kerja ini, kami juga menyediakan layanan pengujian kepada bisnis sesuai dengan standar "AOAC 991.43 Total, serat makanan larut dan tidak larut dalam makanan - Metode enzimatik-gravimetrik MES-TRIS Bufler A".