AOAC 991.43 ใยอาหารทั้งหมด ใยอาหารที่ละลายน้ำได้ และใยอาหารที่ไม่ละลายน้ำในอาหาร - วิธีการวัดน้ำหนักด้วยเอนไซม์ MES-TRIS Bufler A

ตามมาตรฐาน “AOAC 991.43 ใยอาหารทั้งหมด ใยอาหารที่ละลายน้ำได้ และใยอาหารที่ไม่ละลายน้ำในอาหาร - วิธีการย่อยด้วยเอนไซม์แบบชั่งน้ำหนัก MES-TRIS Bufler A” ที่พัฒนาโดยสมาคมนักเคมีวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ (AOAC) ตัวอย่างอาหารแห้งสองตัวอย่าง (หากมีไขมันมากกว่า 10% ให้เอาไขมันออก) จะถูกนำไปย่อยด้วยเอนไซม์แบบต่อเนื่องโดยใช้แอลฟา-อะไมเลสที่ทนความร้อน โปรตีเอส และอะไมโลกลูโคซิเดส เพื่อกำจัดแป้งและโปรตีน สำหรับใยอาหารทั้งหมด ผลิตภัณฑ์จากการย่อยด้วยเอนไซม์จะถูกบำบัดด้วยแอลกอฮอล์เพื่อตกตะกอนใยอาหารที่ละลายน้ำได้ก่อนการกรอง และกากใยอาหารทั้งหมดจะถูกล้างด้วยแอลกอฮอล์และอะซิโตน ทำให้แห้ง และชั่งน้ำหนัก สำหรับใยอาหารที่ไม่ละลายน้ำและใยอาหารที่ละลายน้ำได้ ผลิตภัณฑ์จากการย่อยด้วยเอนไซม์จะถูกกรอง และใยอาหารที่ไม่ละลายน้ำที่เหลืออยู่จะถูกล้างด้วยน้ำอุ่น ทำให้แห้ง และชั่งน้ำหนัก สำหรับใยอาหารที่ละลายน้ำได้ ตัวกรองและกากที่เหลือจะถูกตกตะกอนด้วยแอลกอฮอล์ กรอง ทำให้แห้ง และชั่งน้ำหนัก ปริมาณใยอาหารทั้งหมด ใยอาหารที่ไม่ละลายน้ำ และใยอาหารที่ละลายน้ำได้ที่เหลืออยู่ จะถูกปรับแก้โดยหักลบด้วยโปรตีน เถ้า และช่องว่าง

อุปกรณ์ที่ใช้ในการทดสอบมีดังนี้:

• บีกเกอร์: ขนาด 400 หรือ 600 มิลลิลิตร (รูปทรงใดก็ได้)
• เบ้ากรอง: แผ่นดิสก์เผาผนึก เม็ดหยาบ ขนาดรูพรุน ASTM 40-60 ไมโครเมตร ปริมาตร 60 มิลลิลิตร ทำจากไพเร็กซ์ เตรียมดังนี้: นำไปเผาในเตาเผาเถ้าที่อุณหภูมิ 525 องศาเซลเซียส ค้างคืน ก่อนนำเบ้ากรองออก ให้ปล่อยให้อุณหภูมิในเตาเผาลดลงต่ำกว่า 130 องศาเซลเซียส จากนั้นแช่เบ้ากรองในสารละลายทำความสะอาด 2% ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง

ล้างเบ้าหลอมด้วยน้ำธรรมดา จากนั้นล้างด้วยน้ำปราศจากไอออน ใช้แอซีโทน 15 มิลลิลิตรในการล้างครั้งสุดท้าย แล้วจึงผึ่งลมให้แห้ง เติมเซไลต์ประมาณ 1,0 กรัมลงในเบ้าหลอมที่แห้งแล้ว และอบแห้งที่อุณหภูมิ 130 องศาเซลเซียสจนได้น้ำหนักคงที่ ทำให้เบ้าหลอมเย็นลงในสารดูดความชื้นประมาณ 1 ชั่วโมง แล้วบันทึกน้ำหนักของเบ้าหลอมรวมกับเซไลต์โดยละเอียดถึง 0,1 มิลลิกรัม

• ระบบสุญญากาศ: ปั๊มสุญญากาศหรือเครื่องดูดอากาศพร้อมอุปกรณ์ควบคุม ขวดกรองขนาด 1 ลิตร ผนังหนาพร้อมแขนข้าง อะแดปเตอร์วงแหวนยางสำหรับใช้กับระบบกรอง หน้ากาก
• อ่างน้ำแบบเขย่า: มาพร้อมตัวตั้งเวลาเปิด/ปิดอัตโนมัติ สามารถรักษาอุณหภูมิไว้ที่ 98 องศา บวก/ลบ 2 องศา และสามารถตั้งอุณหภูมิคงที่ได้ที่ 60 องศา
• เครื่องชั่ง: แบบวิเคราะห์ ความแม่นยำบวก/ลบ 0,1 มิลลิกรัม
• เตาอบแบบมัฟเฟิล: สามารถรักษาอุณหภูมิได้ที่ 525 องศาเซลเซียส บวก/ลบ 5 องศาเซลเซียส
• เตาอบ: สามารถรักษาอุณหภูมิได้ระหว่าง 105 ถึง 130 องศาเซลเซียส บวก/ลบ 3 องศา
• สารดูดความชื้น: ซิลิคอนไดออกไซด์หรือสารดูดความชื้นที่เทียบเท่า ทุกๆ สองสัปดาห์ จะนำสารดูดความชื้นไปอบแห้งข้ามคืนที่อุณหภูมิ 130 องศาเซลเซียส
• เครื่องวัดค่า pH: ชดเชยอุณหภูมิ ค่า pH ถูกปรับมาตรฐานด้วยสารละลายบัฟเฟอร์ 4.0, 7.0 และ 10.0
• หลอดหยด: พร้อมปลายหลอดแบบใช้แล้วทิ้ง ความจุ 100-300 µL และ 5 mL
• ผู้จัดจำหน่าย
• เครื่องกวนแม่เหล็กและแท่งกวน

มาตรฐาน AOAC 991.43 เป็นหนึ่งในวิธีการที่เป็นที่ยอมรับอย่างกว้างขวางและมีความสำคัญทางประวัติศาสตร์มากที่สุดสำหรับการหาปริมาณใยอาหารในอาหาร นับตั้งแต่มีการตีพิมพ์ครั้งแรกในปี 1991 วิธีนี้ได้เป็นรากฐานสำคัญของการวิเคราะห์ใยอาหาร ก่อนหน้านี้ ใยอาหารมักวัดได้เฉพาะในรูปของใยหยาบเท่านั้น วิธีการที่อธิบายไว้ในมาตรฐาน AOAC 920.86 ประเมินปริมาณใยอาหารที่แท้จริงต่ำกว่าความเป็นจริงอย่างมาก โดยวัดได้เพียงเซลลูโลสและลิกนินเพียงเล็กน้อย ในขณะที่สูญเสียเฮมิเซลลูโลส เพคติน กัม และแป้งทนต่อการย่อยไปส่วนใหญ่

มาตรฐาน AOAC 991.43 ได้รับการพัฒนาขึ้นเพื่อให้ได้การวัดที่ถูกต้องตามหลักสรีรวิทยามากขึ้น ซึ่งสะท้อนให้เห็นถึงสิ่งที่ยากต่อการย่อยในลำไส้เล็กของมนุษย์ได้ดีกว่า (ซึ่งเป็นนิยามทางสรีรวิทยาของใยอาหาร) และได้กลายเป็นพื้นฐานสำหรับค่าใยอาหารบนฉลากโภชนาการนับล้านฉลากทั่วโลก

วิธีนี้ใช้การผสมผสานระหว่างการย่อยด้วยเอนไซม์และการหาปริมาณโดยวิธีชั่งน้ำหนัก:

• การเตรียมตัวอย่าง: ตัวอย่างทดสอบคู่จะถูกทำให้เป็นเจลด้วยเอนไซม์อัลฟาอะไมเลสที่ทนความร้อน
• การย่อยด้วยเอนไซม์: เอนไซม์โปรตีเอส (เพื่อกำจัดโปรตีน) และอะไมโลกลูโคส (เพื่อไฮโดรไลซ์แป้งที่ย่อยได้ให้เป็นกลูโคส) จำลองสภาวะการย่อยอาหารของมนุษย์ (ค่า pH อุณหภูมิ และระยะเวลาที่คล้ายคลึงกับในช่องปาก กระเพาะอาหาร และลำไส้เล็ก)
• การตกตะกอนของใยอาหาร: เติมเอทานอล (4 เท่าของปริมาตร) เพื่อตกตะกอนพอลิเมอร์ของใยอาหารที่ละลายน้ำได้ และกำจัดสารที่ถูกย่อยแล้วออกไป
• การกรองและการล้าง: กากที่เหลือ (ซึ่งประกอบด้วยใยอาหารทั้งหมด) จะถูกกรอง ล้างด้วยเอทานอลและอะซิโตน ตากให้แห้ง และชั่งน้ำหนัก
• การปรับแก้โปรตีนและเถ้า: ตัวอย่างคู่หนึ่งจะถูกวิเคราะห์หาโปรตีนที่เหลืออยู่ อีกคู่หนึ่งจะถูกวิเคราะห์หาเถ้า จากนั้นนำค่าทั้งสองมาลบกันเพื่อให้ได้ปริมาณใยอาหารทั้งหมดที่ปรับแก้แล้ว
• ขั้นตอนการแยกใยอาหารที่ละลายน้ำได้และละลายน้ำไม่ได้ (ไม่จำเป็น): ก่อนการตกตะกอนด้วยเอทานอล สามารถกรองผลิตภัณฑ์จากการย่อยอาหารได้ กากที่เหลือหลังการกรองคือใยอาหารที่ไม่ละลายน้ำ จากนั้นนำสารละลายที่ได้ไปตกตะกอนด้วยเอทานอลเพื่อแยกใยอาหารที่ละลายน้ำได้ออกมา ใยอาหารทั้งหมด = ใยอาหารที่ไม่ละลายน้ำ + ใยอาหารที่ละลายน้ำได้

ลักษณะพื้นฐานของวิธีการนี้มีดังต่อไปนี้:

• เครื่องมือนี้ใช้วัดทั้งใยอาหารที่ละลายน้ำได้และละลายน้ำไม่ได้
• ประกอบด้วยแป้งทนต่อการย่อยด้วยเอนไซม์
• DP ประกอบด้วยโอลิโกแซ็กคาไรด์ที่ไม่สามารถย่อยได้ส่วนใหญ่ โดย 10 ชนิดแรกมีปริมาณน้อยที่สุด (เนื่องจากจะตกตะกอนในเอทานอล 78%)
• DP ไม่รวมโอลิโกแซ็กคาไรด์ที่ไม่สามารถย่อยได้ 3-9 ซึ่งต้องใช้วิธีการแยกต่างหาก

ข้อดีของวิธีการนี้มีดังต่อไปนี้:

• อุปกรณ์ค่อนข้างง่าย (ไม่จำเป็นต้องใช้ HPLC)
• ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้และสามารถทำซ้ำได้ในห้องปฏิบัติการต่างๆ
• ข้อมูลการตรวจสอบความถูกต้องอย่างครอบคลุมและการศึกษาเปรียบเทียบระหว่างห้องปฏิบัติการ
• เป็นการวัดเส้นใยที่มีความสำคัญทางสรีรวิทยา

การใช้งานจริงในปัจจุบัน:

• วิธีการนี้ยังคงถูกใช้เป็นวิธีอ้างอิงในหลายประเทศที่ยังไม่ได้นำคำจำกัดความใหม่ของ Codex/FDA มาใช้
• มักใช้ในการวิจัยเมื่อต้องการเปรียบเทียบข้อมูลในอดีต
• ห้องปฏิบัติการหลายแห่งนิยมใช้วิธีการใหม่ๆ ที่มีความแตกต่างกันน้อยที่สุด สำหรับผลิตภัณฑ์จากธัญพืช ผัก และอาหารที่มีใยอาหารสูงแบบดั้งเดิม

เป็นเวลานานหลายปีที่องค์กรของเรา ด้วยทีมงานที่มีความสามารถและประสบการณ์ ได้เข้าใจถึงความต้องการของลูกค้า ให้บริการทดสอบขั้นสูงที่พวกเขาต้องการ และให้ความช่วยเหลือในการจัดตั้ง การนำไปใช้ และการปรับปรุงระบบการจัดการ ภายใต้กรอบนี้ เรายังให้บริการทดสอบแก่ธุรกิจต่างๆ ตามมาตรฐาน "AOAC 991.43 ใยอาหารทั้งหมด ใยอาหารที่ละลายน้ำได้ และใยอาหารที่ไม่ละลายน้ำในอาหาร - วิธีการวัดน้ำหนักด้วยเอนไซม์ MES-TRIS Bufler A" อีกด้วย