AOAC 991.43 Общо, разтворими и неразтворими диетични фибри в храни - Ензимно-гравиметричен метод MES-TRIS буфер A

Съгласно стандарта „AOAC 991.43 Общо, разтворими и неразтворими диетични фибри в храни - Ензимно-гравиметричен метод MES-TRIS Bufler A“, разработен от Официалната асоциация на аналитичните химици (AOAC), две проби от сухи храни (обезмаслени, ако съдържат повече от 10% мазнини) се подлагат на последователно ензимно разграждане с термоустойчива α-амилаза, протеаза и амилоглюкозидаза за отстраняване на нишесте и протеини. За общите диетични фибри продуктът от ензимното разграждане се третира с алкохол, за да се утаят разтворимите диетични фибри преди филтриране, а общият остатък от диетични фибри се промива с алкохол и ацетон, суши се и се претегля. За неразтворими и разтворими диетични фибри продуктът от ензимното разграждане се филтрира, а остатъчните неразтворими диетични фибри се промиват с топла вода, сушат се и се претеглят. За разтворимите диетични фибри комбинираният филтър и остатъкът се утаяват с алкохол, филтрират се, сушат се и се претеглят. Остатъчните стойности на общите диетични фибри, неразтворимите и разтворимите диетични фибри се коригират за протеини, пепел и празно пространство.

В тестовете се използва следното оборудване:

• Чаши: 400 или 600 мл (във всякаква форма).
• Филтърен тигел: Синтерован диск, едрозърнест, размер на порите ASTM 40-60 Hm, 60 mL Pyrex. Приготвя се по следния начин: Изгаря се за една нощ в пещ за пепел при 525 градуса. Преди да се извадят тигелите, температурата на пещта се оставя да падне под 130 градуса. След това тигелите се оставят да се накиснат в 2% почистващ разтвор при стайна температура за 1 час.

Тигелите се изплакват с обикновена вода, а след това с дейонизирана вода. За окончателното изплакване се използват 15 mL ацетон, след което се сушат на въздух. Приблизително 1,0 g целит се добавя към сухите тигелове и се сушат при 130 градуса до постоянно тегло. Тигелът се охлажда в десикант за около 1 час и теглото на тигела плюс целита се записва с точност до 0,1 mg.

• Вакуумна система: Вакуумна помпа или аспиратор с регулиращо устройство. Дебелостенна филтърна бутилка с вместимост 1 л със странични рамена. Адаптери с гумени пръстени за използване с филтрация. Маски.
• Водни бани с разклащаща се вода: С автоматичен таймер за включване/изключване, може да поддържа температура от 98 градуса плюс/минус 2 градуса. Постоянна температура може да се настрои на 60 градуса.
• Везни: Аналитични, точност плюс/минус 0,1 мг.
• Муфелна фурна: Може да поддържа температура от 525 градуса плюс/минус 5 градуса.
• Фурна: Може да поддържа температури между 105 и 130 градуса по Целзий плюс/минус 3 градуса.
• Десикант: Силициев диоксид или еквивалентен десикант. На всеки две седмици десикантът се суши за една нощ при 130 градуса.
• pH метър: Температурно компенсиран, pH стойности, стандартизирани с буферни разтвори от 4, 0, 7, 0 и 10, 0.
• Пипети: С накрайници за еднократна употреба. Капацитет 100-300 µL и 5 mL.
• Дистрибутори.
• Магнитни бъркалки и бъркалки с пръчки.

Стандартът AOAC 991.43 е един от най-широко признатите и исторически значими формални методи за определяне на диетични фибри в храни. От първоначалното си публикуване през 1991 г., този метод е крайъгълен камък в анализа на диетичните фибри. Преди този стандарт, диетичните фибри обикновено се измерваха само като сурови фибри. Методът, описан в стандарта AOAC 920.86, силно подценяваше истинското съдържание на диетични фибри, улавяйки само малка част от целулозата и лигнина, докато губеше по-голямата част от хемицелулозата, пектина, гумата и устойчивото нишесте.

Стандартът AOAC 991.43 е разработен, за да осигури по-физиологично точно измерване, което по-добре отразява какво всъщност се съпротивлява на храносмилането в тънките черва на човека (физиологичното определение за диетични фибри) и се е превърнал в основа за стойностите на диетичните фибри върху милиони етикети за хранителни стойности по целия свят.

Този метод използва комбинация от ензимно разграждане и гравиметрично определяне:

• Подготовка на пробите: Двойните тестови проби се желатинизират с термоустойчива α-амилаза.
• Ензимно храносмилане: Протеазните (за отстраняване на протеини) и амилоглюкозните (за хидролизиране на смилаемото нишесте до глюкоза) ензими симулират човешки храносмилателни условия (pH, температура и продължителност, подобни на тези в устата, стомаха и тънките черва).
• Утаяване на диетични фибри: Добавя се етанол (4 обема), за да се утаят разтворимите полимери на диетичните фибри и да се отстранят смлените вещества.
• Филтриране и промиване: Остатъкът (съдържащ общо диетични фибри) се филтрира, промива с етанол и ацетон, суши се и се претегля.
• Корекция за протеин и пепел: Едната двойка проби се анализира за остатъчен протеин, другата за пепел; те се изваждат, за да се получи коригираното общо количество хранителни фибри.
• По избор разделяне на разтворими и неразтворими фибри: Преди утаяване с етанол, храносмилателният продукт може да се филтрира. Остатъкът след филтриране = неразтворими диетични фибри. Филтратът след това се утаява с етанол, за да се извлекат разтворимите диетични фибри. Общо диетични фибри = Неразтворими диетични фибри + разтворими диетични фибри.

Основните характеристики на този метод са следните:

• Той измерва както разтворимите, така и неразтворимите диетични фибри.
• Съдържа устойчиво нишесте, което е устойчиво на ензимно смилане.
• DP съдържа повечето несмилаеми олигозахариди, като най-ниското съдържание имат първите 10 (защото се утаяват в 78% етанол).
• DP изключва несмилаеми олигозахариди 3-9, които изискват отделни методи.

Предимствата на този метод са следните:

• Сравнително просто оборудване (не се изисква HPLC).
• Надеждни и възпроизводими резултати във всички лаборатории.
• Изчерпателни данни за валидиране и междулабораторни изследвания.
• Той измерва физиологично значимите влакна.

Текущо практическо приложение:

• Той все още се използва като референтен метод в много страни, които не са приели новата дефиниция на Codex/FDA.
• Често се използва в изследванията при сравняване на исторически данни.
• Нови методи, при които разликите са минимални, са предпочитани от много лаборатории за зърнени продукти, зеленчуци и традиционни храни с високо съдържание на фибри.

В продължение на много години нашата организация, със своя компетентен и опитен персонал, разбира нуждите на своите клиенти, предоставяйки им необходимите съвременни услуги за тестване и съдействайки за установяването, внедряването и подобряването на системите за управление. В тази рамка ние също така предоставяме услуги за тестване на предприятия в съответствие със стандарта „AOAC 991.43 Общо, разтворими и неразтворими диетични фибри в храни - Ензимно-гравиметричен метод MES-TRIS Bufler A“.