AOAC 991.43 Total, löslig och olöslig kostfiber i livsmedel - Enzymatisk-gravimetrisk metod MES-TRIS Bufler A

Enligt standarden "AOAC 991.43 Total, löslig och olöslig kostfiber i livsmedel - Enzymatisk-gravimetrisk metod MES-TRIS Bufler A", utvecklad av Official Association of Analytical Chemists (AOAC), utsätts två prover vardera av torkade livsmedel (avfettade om de innehåller mer än 10 % fett) för sekventiell enzymatisk nedbrytning med värmebeständigt α-amylas, proteas och amyloglukosidas för att avlägsna stärkelse och protein. För total kostfiber behandlas enzymnedbrytningsprodukten med alkohol för att fälla ut den lösliga kostfibern före filtrering, och den totala kostfiberresten tvättas med alkohol och aceton, torkas och vägs. För olöslig och löslig kostfiber filtreras enzymnedbrytningsprodukten, och den återstående olösliga kostfibern tvättas med varmt vatten, torkas och vägs. För löslig kostfiber fälls det kombinerade filtret och resten ut med alkohol, filtreras, torkas och vägs. Restvärdena för total kostfiber, olöslig och löslig kostfiber korrigeras för protein, aska och tomrum.

Följande utrustning används i testerna:

• Bägare: 400 eller 600 ml (i valfri form).
• Filterdegel: Sintrad skiva, grovkornig, ASTM 40-60 Hm porstorlek, 60 ml Pyrex. Den bereds enligt följande: Den förbränns över natten i en asugn vid 525 grader. Innan deglarna tas bort får ugnstemperaturen sjunka under 130 grader. Deglarna får sedan ligga i blöt i en 2 % rengöringslösning vid rumstemperatur i 1 timme.

Deglarna sköljs med vanligt vatten och sedan med avjoniserat vatten. 15 ml aceton används för den sista sköljningen, och sedan lufttorkas de. Cirka 1,0 g celit tillsätts till de torra deglarna och torkas vid 130 grader till konstant vikt. Degeln kyls i ett torkmedel i cirka 1 timme, och vikten av degeln plus celiten registreras med en noggrannhet på 0,1 mg.

• Vakuumsystem: Vakuumpump eller sug med regleranordning. Tjockväggig 1-liters filterflaska med sidoarmar. Gummiringsadaptrar för användning med filtrering. Masker.
• Skakande vattenbad: Med en automatisk på/av-timer kan den hålla en temperatur på 98 grader plus/minus 2 grader. En konstant temperatur kan ställas in på 60 grader.
• Våg: Analytisk, noggrannhet plus/minus 0,1 mg.
• Muffelugn: Kan hålla en temperatur på 525 grader plus/minus 5 grader.
• Ugn: Kan hålla temperaturer mellan 105 och 130 grader Celsius plus/minus 3 grader.
• Torkmedel: Kiseldioxid eller motsvarande torkmedel. Varannan vecka torkas torkmedlet över natten vid 130 grader.
• pH-mätare: Temperaturkompenserad, pH-värden standardiserade med buffertlösningar på 4, 0, 7, 0 och 10, 0.
• Pipetter: Med engångsspetsar. 100–300 µL och 5 ml kapacitet.
• Distributörer.
• Magnetiska omrörare och omrörningsstavar.

AOAC 991.43-standarden är en av de mest erkända och historiskt betydelsefulla formella metoderna för att bestämma kostfiber i livsmedel. Sedan den första publiceringen 1991 har denna metod varit en hörnsten i analys av kostfibrer. Före denna standard mättes kostfiber i allmänhet endast som råfiber. Metoden som beskrivs i AOAC 920.86-standarden underskattade kraftigt det verkliga kostfiberinnehållet och fångade endast en liten andel cellulosa och lignin samtidigt som den förlorade det mesta av hemicellulosa, pektin, gummi och resistent stärkelse.

AOAC 991.43-standarden utvecklades för att ge en mer fysiologiskt noggrann mätning som bättre återspeglar vad som faktiskt motstår matsmältning i den mänskliga tunntarmen (den fysiologiska definitionen av kostfiber), och har blivit grunden för kostfibervärden på miljontals näringsetiketter världen över.

Denna metod använder en kombination av enzymatisk nedbrytning och gravimetrisk bestämning:

• Provberedning: Dubbeltestprover gelatineras med värmebeständigt α-amylas.
• Enzymatisk matsmältning: Proteas (för att avlägsna protein) och amyloglukos (för att hydrolysera smältbar stärkelse till glukos) enzymer simulerar mänskliga matsmältningsförhållanden (pH, temperatur och varaktighet liknar de i munnen, magsäcken och tunntarmen).
• Utfällning av kostfiber: Etanol (4 volymer) tillsätts för att fälla ut de lösliga kostfiberpolymererna och avlägsna de nedbrutna ämnena.
• Filtrering och tvättning: Återstoden (innehållande total kostfiber) filtreras, tvättas med etanol och aceton, torkas och vägs.
• Protein- och askkorrigering: Ett par prover analyseras för restprotein, det andra för aska; dessa subtraheras för att få den korrigerade totala kostfibern.
• Valfri separation av lösliga och olösliga fibrer: Före etanolfällning kan matsmältningsprodukten filtreras. Återstoden efter filtrering = olöslig kostfiber. Filtratet fälls sedan ut med etanol för att återvinna löslig kostfiber. Total kostfiber = Olöslig kostfiber + löslig kostfiber.

De grundläggande egenskaperna hos denna metod är följande:

• Den mäter både lösliga och olösliga kostfibrer.
• Den innehåller resistent stärkelse som är resistent mot enzymatisk nedbrytning.
• DP innehåller de flesta av de osmältbara oligosackariderna, varav den lägsta är de 10 bästa (eftersom de utfälls i 78 % etanol).
• DP exkluderar osmältbara oligosackarider 3-9, vilka kräver separata metoder.

Fördelarna med denna metod är följande:

• Relativt enkel utrustning (ingen HPLC krävs).
• Robusta och reproducerbara resultat i olika laboratorier.
• Omfattande valideringsdata och mellanlaboratoriestudier.
• Den mäter fysiologiskt relevanta fibrer.

Nuvarande praktisk användning:

• Den används fortfarande som referensmetod i många länder som inte har antagit den nya Codex/FDA-definitionen.
• Det används ofta i forskning när man jämför historiska data.
• Nya metoder, där skillnaderna är minimala, föredras av många laboratorier för spannmålsprodukter, grönsaker och traditionella fiberrika livsmedel.

I många år har vår organisation, med sin kompetenta och erfarna personal, förstått sina kunders behov, tillhandahållit de avancerade testtjänster de behöver och hjälpt till med etablering, implementering och förbättring av ledningssystem. Inom detta ramverk tillhandahåller vi även testtjänster till företag i enlighet med standarden "AOAC 991.43 Total, löslig och olöslig kostfiber i livsmedel - Enzymatisk-gravimetrisk metod MES-TRIS Bufler A".