AOAC 991.43 Fibra alimentar total, solúvel e insolúvel em alimentos - Método enzimático-gravimétrico MES-TRIS Tampão A

De acordo com a norma “AOAC 991.43 Fibra alimentar total, solúvel e insolúvel em alimentos - Método enzimático-gravimétrico MES-TRIS Buffer A”, desenvolvida pela Associação Oficial de Químicos Analíticos (AOAC), duas amostras de cada alimento seco (desengordurado se contiverem mais de 10% de gordura) são submetidas à digestão enzimática sequencial com α-amilase resistente ao calor, protease e amiloglucosidase para remover amido e proteína. Para a fibra alimentar total, o produto da digestão enzimática é tratado com álcool para precipitar a fibra alimentar solúvel antes da filtração, e o resíduo de fibra alimentar total é lavado com álcool e acetona, seco e pesado. Para a fibra alimentar insolúvel e solúvel, o produto da digestão enzimática é filtrado e a fibra alimentar insolúvel residual é lavada com água morna, seca e pesada. Para a fibra alimentar solúvel, o filtro e o resíduo combinados são precipitados com álcool, filtrados, secos e pesados. Os valores residuais de fibra alimentar total, fibra alimentar insolúvel e fibra alimentar solúvel são corrigidos para proteína, cinzas e espaço vazio.

Os seguintes equipamentos são utilizados nos testes:

• Béquer: 400 ou 600 mL (em qualquer formato).
• Cadinho de filtração: Disco sinterizado, de grão grosso, com porosidade ASTM 40-60 µm, 60 mL de Pyrex. O preparo é o seguinte: o cadinho é incinerado durante a noite em um forno de cinzas a 525 °C. Antes de remover os cadinhos, a temperatura do forno é reduzida para menos de 130 °C. Em seguida, os cadinhos são deixados de molho em uma solução de limpeza a 2% à temperatura ambiente por 1 hora.

Os cadinhos são enxaguados com água normal e, em seguida, com água deionizada. Utiliza-se 15 mL de acetona para o enxágue final, e então eles são secos ao ar. Aproximadamente 1,0 g de Celite é adicionado aos cadinhos secos e seco a 130 °C até atingir peso constante. O cadinho é resfriado em um dessecante por aproximadamente 1 hora, e o peso do cadinho com a Celite é registrado com precisão de 0,1 mg.

• Sistema de vácuo: Bomba de vácuo ou aspirador com dispositivo regulador. Frasco de filtro de 1 L de paredes grossas com braços laterais. Adaptadores de anel de borracha para uso com filtração. Máscaras.
• Banho-maria com agitação: Com temporizador automático liga/desliga, mantém uma temperatura de 98 graus com uma variação de ± 2 graus. Uma temperatura constante de 60 graus pode ser ajustada.
• Balança: Analítica, precisão de mais ou menos 0,1 mg.
• Forno mufla: Pode manter uma temperatura de 525 graus, com uma variação de mais ou menos 5 graus.
• Forno: Pode manter temperaturas entre 105 e 130 graus Celsius, com uma variação de mais ou menos 3 graus.
• Dessecante: Dióxido de silício ou dessecante equivalente. A cada duas semanas, o dessecante é seco durante a noite a 130 graus.
• Medidor de pH: Compensação de temperatura, valores de pH padronizados com soluções tampão de 4, 0, 7, 0 e 10, 0.
• Pipetas: Com ponteiras descartáveis. Capacidade de 100-300 µL e 5 mL.
• Distribuidores.
• Agitadores magnéticos e varetas de agitação.

A norma AOAC 991.43 é um dos métodos formais mais amplamente reconhecidos e historicamente significativos para a determinação de fibras alimentares em alimentos. Desde sua publicação inicial em 1991, esse método tem sido um pilar da análise de fibras alimentares. Antes dessa norma, as fibras alimentares eram geralmente medidas apenas como fibras brutas. O método descrito na norma AOAC 920.86 subestimava severamente o verdadeiro teor de fibras alimentares, capturando apenas uma pequena fração de celulose e lignina, enquanto perdia a maior parte da hemicelulose, pectina, goma e amido resistente.

A norma AOAC 991.43 foi desenvolvida para fornecer uma medição fisiologicamente mais precisa, que reflita melhor o que realmente resiste à digestão no intestino delgado humano (a definição fisiológica de fibra alimentar), e tornou-se a base para os valores de fibra alimentar em milhões de rótulos nutricionais em todo o mundo.

Este método utiliza uma combinação de digestão enzimática e determinação gravimétrica:

• Preparação da amostra: As amostras para o teste duplo são gelatinizadas com α-amilase resistente ao calor.
• Digestão enzimática: As enzimas protease (para remover proteínas) e amiloglicose (para hidrolisar o amido digerível em glicose) simulam as condições digestivas humanas (pH, temperatura e duração semelhantes às da boca, estômago e intestino delgado).
• Precipitação da fibra alimentar: Adiciona-se etanol (4 volumes) para precipitar os polímeros solúveis da fibra alimentar e remover as substâncias digeridas.
• Filtragem e lavagem: O resíduo (contendo a fibra alimentar total) é filtrado, lavado com etanol e acetona, seco e pesado.
• Correção de proteína e cinzas: Um par de amostras é analisado para proteína residual, o outro para cinzas; esses valores são subtraídos para obter a fibra alimentar total corrigida.
• Separação opcional de fibras solúveis e insolúveis: Antes da precipitação com etanol, o produto da digestão pode ser filtrado. O resíduo restante após a filtração corresponde à fibra alimentar insolúvel. O filtrado é então precipitado com etanol para recuperar a fibra alimentar solúvel. Fibra alimentar total = Fibra alimentar insolúvel + fibra alimentar solúvel.

As características básicas deste método são as seguintes:

• Mede tanto a fibra alimentar solúvel quanto a insolúvel.
• Contém amido resistente, que é resistente à digestão enzimática.
• O DP contém a maioria dos oligossacarídeos não digeríveis, sendo os 10 primeiros os de menor concentração (pois precipitam em etanol a 78%).
• O DP exclui os oligossacarídeos não digeríveis 3-9, que requerem métodos separados.

As vantagens deste método são as seguintes:

• Equipamento relativamente simples (não requer HPLC).
• Resultados robustos e reproduzíveis em diferentes laboratórios.
• Dados de validação abrangentes e estudos interlaboratoriais.
• Mede fibras fisiologicamente relevantes.

Uso prático atual:

• Ainda é utilizado como método de referência em muitos países que não adotaram a nova definição do Codex/FDA.
• É frequentemente utilizado em pesquisas para comparar dados históricos.
• Novos métodos, nos quais as diferenças são mínimas, são preferidos por muitos laboratórios para produtos à base de grãos, vegetais e alimentos tradicionais ricos em fibras.

Há muitos anos, nossa organização, com sua equipe competente e experiente, compreende as necessidades de seus clientes, fornecendo os serviços avançados de análise que eles exigem e auxiliando no estabelecimento, implementação e aprimoramento de sistemas de gestão. Nesse contexto, também oferecemos serviços de análise para empresas em conformidade com a norma "AOAC 991.43 Fibra alimentar total, solúvel e insolúvel em alimentos - Método enzimático-gravimétrico MES-TRIS Tampão A".