AOAC 991.43 Gıdalardaki Toplam, Çözünür ve Çözünmez Diyet Lifi - Enzimatik-Gravimetrik Yöntem MES-TRIS Bufler A

Resmi Analitik Kimyagerler Derneği (AOAC) tarafından geliştirilen “AOAC 991.43 Gıdalardaki toplam, çözünür ve çözünmez diyet lifi - Enzimatik-gravimetrik yöntem MES-TRIS Bufler A“ standardında prensip olarak kurutulmuş gıdaların (eğer yüzde 10’dan fazla yağ içeriyorsa yağdan arındırılmış) ikişer örneği, nişasta ve proteini uzaklaştırmak için ısıya dayanıklı α-amilaz, proteaz ve amiloglikozidaz ile ardışık enzimatik sindirime tabi tutulur. Toplam diyet lifi için, enzim sindirim ürünü, filtrelenmeden önce çözünür diyet lifini çöktürmek için alkolle işlenir ve toplam diyet lifi kalıntısı alkol ve asetonla yıkanır, kurutulur ve tartılır. Çözünmeyen ve çözünen diyet lifi için, enzim sindirim ürünü filtrelenir ve kalıntı çözünmeyen diyet lifi ılık suyla yıkanır, kurutulur ve tartılır. Çözünen diyet lifi için, birleştirilmiş filtre ve tortu alkolle çöktürülür, filtrelenir, kurutulur ve tartılır. Toplam diyet lifi, çözünmeyen ve çözünen diyet lifi kalıntı değerleri protein, kül ve boş değer için düzeltilir.

Testlerde şu ekipman kullanılır:

• Beherler: 400 veya 600 mL (her türlü formda).
• Filtreleme potası: Sinterlenmiş diskli, iri taneli, ASTM 40-60 Hm gözenek boyutlu, 60 mL Pyrex. Şu şekilde hazırlanır. 525 derecede bir gece boyunca kül fırınında küllenir. Potaları çıkarmadan önce fırın sıcaklığının 130 derecenin altına düşmesi beklenir. Potalar oda sıcaklığında yüzde 2’lik temizleme çözeltisinde 1 saat bekletilir.

Potalar normal su ve ardından deiyonize su ile durulanır. Son durulama için 15 mL aseton kullanılır ve ardından hava ile kurutulur. Kuru potalara yaklaşık 1,0 g Celite eklenir ve 130 derecede sabit ağırlığa kadar kurutulur. Pota yaklaşık 1 saat kurutucuda soğutulur ve pota artı Celite’in ağırlığı en yakın 0,1 mg’a kadar kaydedilir.

• Vakum sistemi: Düzenleyici cihazlı vakum pompası veya aspiratör. Yan kollu, kalın duvarlı 1 L’lik filtre şişesi. Filtreleme ile kullanım için kauçuk halka adaptörleri. Maskeler.
• Çalkalamalı su banyoları: Otomatik açma-kapama zamanlayıcısı ile 98 derece artı/eksi 2 dereceyi koruyabilir. Sabit sıcaklık, 60 dereceye ayarlanabilir.
• Terazi: Analitik, hassasiyet artı/eksi 0,1 mg.
• Muffle fırın: 525 derece artı/eksi 5 dereceyi koruyabilir.
• Fırın: 105 ve 130 derece artı/eksi 3 dereceyi koruyabilir.
• Kurutucu: Silikon dioksit veya eşdeğer kurutucu ile. İki haftada bir, kurutucu 130 derecede gece boyunca kurutulur.
• pH metre: Sıcaklık kompanzasyonlu, pH değeri 4, 0, 7, 0 ve 10, 0 tampon çözeltileri ile standardize edilmiştir.
• Pipetler: Tek kullanımlık uçlarla. 100-300 µL ve 5 mL kapasite.
• Dağıtıcılar.
• Manyetik karıştırıcılar ve karıştırma çubukları.

AOAC 991.43 standardı, gıdalardaki diyet lifinin belirlenmesi için en yaygın olarak tanınan ve tarihsel olarak en önemli resmi yöntemlerden biridir. Bu yöntem, ilk olarak yayınlandığı 1991 yılından bugüne diyet lifi analizinin temel taşlarından biri olmuştur. Bu standart yayınlanmadan önce diyet lifi genellikle sadece ham lif olarak ölçülüyordu. AOAC 920.86 standardında tanımlanan yöntem, selüloz ve lignin’in sadece küçük bir kısmını yakalarken, hemiselüloz, pektin, sakız ve dirençli nişastanın çoğunu kaybettiği için gerçek diyet lifi içeriğini ciddi şekilde hafife alıyordu.

AOAC 991.43 standardı, insan ince bağırsağında sindirime gerçekten direnen şeyi (diyet lifinin fizyolojik tanımı) daha iyi yansıtan, fizyolojik olarak daha uygun bir ölçüm sağlamak için geliştirilmiştir ve dünya genelinde milyonlarca beslenme etiketindeki diyet lifi değerlerinin temeli haline gelmiştir.

Bu yöntem, enzimatik sindirim ve gravimetrik tayinin bir kombinasyonunu kullanır:

• Örnek hazırlama: Çift test numuneleri ısıya dayanıklı α-amilaz ile jelatinleştirilir.
• Enzimatik sindirim: Proteaz (proteini uzaklaştırmak için) ve amiloglukoza (sindirilebilir nişastayı glikoza hidrolize etmek için) enzimleri, insan sindirim koşullarını (ağız, mide ve ince bağırsaktakine benzer pH değeri, sıcaklık ve süre) simüle eder.
• Diyet lifinin çöktürülmesi: Çözünür diyet lifi polimerlerini çöktürmek ve sindirilmiş maddeleri uzaklaştırmak için etanol (4 hacim) eklenir.
• Filtreleme ve yıkama: Kalıntı (toplam diyet lifi içeren) filtrelenir, etanol ve aseton ile yıkanır, kurutulur ve tartılır.
• Protein ve kül düzeltmesi: Bir çift numune kalıntı protein için, diğeri kül için analiz edilir, bunlar çıkarılarak düzeltilmiş toplam diyet lifi elde edilir.
• Çözünür ve çözünmez liflerin isteğe bağlı olarak ayrılması: Etanol çöktürmesinden önce, sindirim ürünü filtrelenebilir. Filtrasyondan sonra kalan kalıntı = çözünmez diyet lifi. Daha sonra süzüntü, çözünür diyet lifini geri kazanmak için etanol ile çöktürülür. Toplam diyet lifi = Çözünmez diyet lifi + çözünür diyet lifi.

Bu yöntemin temel özellikleri şu şekildedir:

• Hem çözünür hem de çözünmez diyet lifini ölçer.
• Enzimatik sindirime dayanıklı dirençli nişastayı içerir.
• DP en düşük 10 olan sindirilemeyen oligosakkaritlerin çoğunu içerir (çünkü yüzde 78 etanolde çökelirler)
• DP 3-9 arası olan sindirilemeyen oligosakkaritleri hariç tutar, bunlar ayrı yöntemler gerektirir.

Bu yöntemin avantajları şunlardır:

• Nispeten basit ekipman (HPLC gerekmez).
• Laboratuvarlar arası sağlam ve tekrarlanabilir sonuçlar.
• Kapsamlı doğrulama verileri ve laboratuvarlar arası çalışmalar.
• Fizyolojik olarak ilgili lifleri ölçer.

Güncel pratik kullanım:

• Yeni Codex / FDA tanımını benimsemeyen birçok ülkede hala referans yöntem olarak kullanılmaktadır.
• Tarihsel verileri karşılaştırırken araştırmalarda sıklıkla kullanılır.
• Yeni yöntemlerle farkların minimum olduğu tahıl ürünleri, sebzeler ve geleneksel yüksek lifli gıdalar için birçok laboratuvar tarafından tercih edilmektedir.

Kuruluşumuz, yıllardır yetkin ve deneyimli bir kadro ile müşterilerinin ihtiyaçlarını anlamakta, ihtiyaç duydukları ileri test hizmetlerini vermekte ve yönetim sistemlerinin kurulması, uygulanması ve iyileştirilmesi konusunda yardımcı olmaktadır. Bu çerçevede işletmelere “AOAC 991.43 Gıdalardaki toplam, çözünür ve çözünmez diyet lifi - Enzimatik-gravimetrik yöntem MES-TRIS Bufler A“ standardına uygun test hizmetleri de verilmektedir.